ERβ與ER信號(hào)傳導(dǎo)通路MAPK在小鼠乳腺癌中相互作用機(jī)制.pdf

1、目的：利用已具備的小鼠乳腺癌模型--BCML-TA299體內(nèi)研究雌激素、雌激素受體拮抗劑及化療藥物環(huán)磷酰胺對(duì)雌激素受體β亞型(ERβ)與ER信號(hào)傳導(dǎo)通路-MAPK的作用，初步探討ERβ與MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路中的關(guān)鍵酶MEK-2和p-ERK的蛋白表達(dá)相關(guān)性，從而闡述ERβ與MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路在乳腺癌發(fā)生發(fā)展及凋亡過(guò)程中的相互作用機(jī)制。 方法：將受試動(dòng)物TA2系小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、三苯氧胺(TAM)組、雌二醇(E2)組、環(huán)磷酰胺(

2、CTX)組、聯(lián)合組(TAM+CTX)，在用BCML-TA299荷瘤小鼠的乳腺腫瘤原位移植基礎(chǔ)上，實(shí)驗(yàn)組分別給予TAM、E2、CTX及TAM+CTX聯(lián)合干預(yù)，于不同時(shí)間點(diǎn)動(dòng)態(tài)觀察腫瘤的大體形態(tài)、病理組織學(xué)形態(tài)；采用免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)腫瘤組織中某些相關(guān)蛋白(ERβ、MEK-2、p-ERK)于不同時(shí)間點(diǎn)分組進(jìn)行動(dòng)態(tài)聯(lián)合檢測(cè)和對(duì)比，研究其分子生物學(xué)特性：采用流式細(xì)胞分析技術(shù)檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)各組腫瘤細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的改變，采用環(huán)DTPA法對(duì)對(duì)照組

3、、TAM組、聯(lián)合組小鼠尾靜脈注射放射性核素Sm-153，2ug/1mCi，進(jìn)行細(xì)胞凋亡顯像。 結(jié)果：BCML-TA299乳腺癌原位移植瘤生長(zhǎng)大致分3個(gè)時(shí)期，1-10天腫瘤生長(zhǎng)緩慢，為腫瘤潛伏期，11-20天腫瘤生長(zhǎng)迅速，大小約增加了7-10倍，為指數(shù)生長(zhǎng)期，21-30天腫瘤大小增加了約1-2倍，為穩(wěn)定生長(zhǎng)期，在移植瘤生長(zhǎng)的早期和中期三組腫瘤大小差別不明顯，后期E2組腫瘤大小大于對(duì)照組和TAM組(P<0.01)；CTX組及聯(lián)合組腫

4、瘤生長(zhǎng)緩慢，腫瘤小于另外三組，其中聯(lián)合組尤為明顯(P<0.01)；對(duì)照組、E2組瘤細(xì)胞生長(zhǎng)活躍，呈侵襲性生長(zhǎng)，核膜、核仁清楚，核分裂多見(jiàn)，瘤細(xì)胞間有豐富血管，變性壞死少見(jiàn)，而TAM組、CTX組及聯(lián)合組各期瘤細(xì)胞均呈不同程度的灶狀壞死，可見(jiàn)凋亡小體和壞死細(xì)胞形成的鈣化灶，瘤細(xì)胞腫脹，核亦腫脹，胞漿內(nèi)和胞核內(nèi)有空泡，核碎裂、核固縮多見(jiàn)，部分細(xì)胞核膜、核仁消失，核分裂少見(jiàn)，瘤組織間血管與同時(shí)期對(duì)照組和E2組比較減少，且壞死區(qū)域血管變性，其中聯(lián)

5、合組最為明顯，TAM組肺轉(zhuǎn)移出現(xiàn)較另外兩組為晚，E2組肺轉(zhuǎn)移率高于TAM組(P<0.05)；免疫組化結(jié)果顯示ERβ與MEK-2、p-ERK三種蛋白在各組腫瘤細(xì)胞中均有不同程度的表達(dá)，表達(dá)率為100％；E2可激活ERβ、MEK-2、p-ERK明顯上調(diào)，TAM和CTX均可抑制ERβ、MEK-2和p-ERK蛋白表達(dá)，聯(lián)合組尤為明顯，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)；ERβ的蛋白表達(dá)與MEK-2、p-ERK的蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，ERβ與M

6、EK-2、p-ERK協(xié)同表達(dá)(P<0.01)；流式細(xì)胞分析提示E2可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞從G1期向S期轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致細(xì)胞分裂增殖，腫瘤進(jìn)展；TAM和CTX使腫瘤細(xì)胞停滯于G1期，細(xì)胞增殖受抑制，并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，TAM組和聯(lián)合組在G0期左側(cè)出現(xiàn)凋亡峰，凋亡率分別為2.3％和13.1％，與細(xì)胞凋亡顯像結(jié)果相符。 結(jié)論：E2可通過(guò)激活ERβ與MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路中的關(guān)鍵酶促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，轉(zhuǎn)移發(fā)生；TAM和CTX可通過(guò)拮抗并下調(diào)ERβ、MEK-2和p