2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究不同濃度的MB(1.0μmol/L,5.0pmol/L,10.0μmol/L),在光照度為40000LUX,分別熒光照射血漿0、20、40、60min,滅活血漿病毒DNA,通過熒光定量PCR技術對血漿病毒滅活的各個不同時間段乙肝病毒DNA濃度進行監(jiān)測,判斷滅活效果,選定最佳滅活條件,并觀察病毒滅活后對血漿成分的影響。研究5.0μmol/L的MB濃度,在光照度為40000LUX,分別照射紅細胞懸液0、20、40、60min,觀察

2、MB法處理懸液的同時膜的損傷程度,間接了解對紅細胞生物學功能的影響,探討亞甲藍光化學法在紅細胞制品病毒滅活方面的可行性。 方法:在己知HBV-DNA陽性血漿中加入MB,調(diào)整MB終濃度分別為1.0μmol/l、5.0μmol/l、10.0μmol/l,光照度為40000LUX,照射時間分別為0min、20min、40min、60 min,在各點分別取樣抽提基因組DNA用于熒光定量分析,測定HBV-DNA的濃度,推斷在不同時間和濃度

3、下的滅活效果。在滅活效果最好的點取樣檢測血漿正常成分有無顯著變化,其中包括生化指標,酶學指標,凝血因子FⅧ:C活性,SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳觀察蛋白亞基的變化,蛋白免疫印跡觀察血漿的抗體蛋白活性變化。同樣方法,亞甲藍光化學法處理紅細胞懸液,光照度為40000LUX,MB濃度為5.0μmol/L,在光照0min、20min、40min、60 min后的不同時間點提膜測定紅細胞膜Na+-K+ATP酶,膜AchE活性,并觀察紅細胞形態(tài)的變化及

4、膜的通透性改變。 結果:當MB為10.0μmol/L,光照60min時,滅活乙肝病毒的效果最好,對于高拷貝數(shù)的病毒濃度,在本實驗的條件下,尚無法完全滅活病毒,但可以使HBV-DNA濃度明顯下降;從病毒滅活的表格看,滅活效果與時間和MB濃度呈正相關,作用60min時血漿中主要成分的生化指標無顯著變化及凝血因子FⅧ:C活性無明顯改變,部分血漿酶活性有明顯下降(P<0.05)。血漿蛋白的亞基數(shù)目和遷移速度未見明顯變化,血漿的抗體蛋白也

5、具有正常的生物學活性。在用于紅細胞制品滅活方面,亞甲藍法還有缺陷,對紅細胞膜的損傷較明顯。隨著照射時間的延長,紅細胞的邊緣出現(xiàn)了不規(guī)則、粘連,附著物也逐漸增多。紅細胞的溶血度顯著增大(P<0.05),幾乎呈線性。在照射過程中,Na+-K+ATP酶無明顯下降。膜AchE在40min后下降速率增大,與對照組比,下降了大約65%(P<0.05)。在照射20min后滲透脆性也漸出現(xiàn)明顯升高(P<0.05)。推測亞甲藍對膜損傷的主要機制可能是單線

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