let-7 microRNA與乳腺癌化療耐藥關(guān)系的研究.pdf

1、乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，目前已是女性最常見的惡性腫瘤，是女性惡性腫瘤死亡原因的第二位。目前新輔助化療已是治療局部晚期乳腺癌患者的常規(guī)手段之一，其療效是患者局部復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和總體生存率的獨(dú)立預(yù)后因子，但目前新輔助化療的患者有效率最高僅達(dá)到800％，因此找到預(yù)測(cè)乳腺癌化療敏感性的生物學(xué)指標(biāo)異常重要。 在人類癌癥的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后的研究中，調(diào)控性非編碼微小RNA（microRNA，miRNA）的作用倍受人們關(guān)注。MiRNA有

2、組織特異性、分化和發(fā)育的時(shí)間性以及表達(dá)特異性，可以發(fā)揮抑癌基因或類似癌基因的作用。與乳腺癌相關(guān)的microRNA中，let—7家族倍受關(guān)注。let—7最早在線蟲中發(fā)現(xiàn)，它能調(diào)控細(xì)胞的分化和增殖的時(shí)序。let—7在乳腺癌組織中相對(duì)低表達(dá)，它能在轉(zhuǎn)錄后水平抑制RAS和HMGA2蛋白的表達(dá)，因此被認(rèn)為是抑癌的“miRNA”。最近的文獻(xiàn)顯示let—7與腫瘤化療耐藥相關(guān)，let—7低表達(dá)的卵巢癌細(xì)胞和卵巢癌細(xì)胞系對(duì)鉑類耐藥。因此，深入研究let—

3、7與乳腺癌化療耐藥之間的關(guān)系，有助于研究乳腺癌化療敏感的預(yù)測(cè)因子，理解乳腺癌化療耐藥的機(jī)制并為乳腺癌的生物靶向治療提供新的方向。 第一章 let—7 microRNA表達(dá)水平與乳腺癌化療耐藥關(guān)系的臨床研究 目的： 研究接受含表阿霉素方案新輔助化療的患者化療前乳腺癌組織中l(wèi)et—7micorRNA的表達(dá)水平與其化療敏感性之間的關(guān)系。 方法： 收集接受含表阿霉素方案新輔助化療的患者化療前的新鮮乳腺癌組

4、織和石蠟包埋的乳腺癌組織，分別用real—time RT—PCR和原位雜交法檢測(cè)乳腺癌組織中l(wèi)et—7 microRNA的表達(dá)水平；用乳腺B超測(cè)量化療前后患者乳腺癌的大小以評(píng)價(jià)化療的療效。通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，研究患者的乳腺癌組織中l(wèi)et—7 microRNA表達(dá)水平與患者化療敏感性之間的關(guān)系。 結(jié)果： 共收集23例接受新輔助化療患者化療前的新鮮乳腺癌組織，化療耐藥組（cSD+cPD）為8例，化療敏感組（cCR+cPR）為15

5、例，Real—time RT—PCR檢測(cè)let—7表達(dá)水平顯示，化療耐藥組let—7表達(dá)水平明顯低于化療敏感組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。收集33例接受新輔助化療患者的石蠟包埋的乳腺癌組織，化療耐藥組（cSD+cPD）為9例，化療敏感組（cCR+cPR）為24例，原位雜交檢測(cè)let—7表達(dá)水平顯示，化療耐藥組let—7表達(dá)水平明顯低于化療敏感組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。 結(jié)論： let—7 micro

6、NA在對(duì)表阿霉素耐藥的乳腺癌組織中相對(duì)低表達(dá)，可能作為預(yù)測(cè)乳腺癌對(duì)表阿霉素敏感性的潛在生物學(xué)因子。 第二章提高let—7的表達(dá)水平可以增加乳腺癌細(xì)胞對(duì)表阿霉素的敏感性 目的： 采用microRNA mimics轉(zhuǎn)染技術(shù)提高SK—3rd球囊細(xì)胞中l(wèi)et—7 microRNA的表達(dá)，研究提高乳腺癌細(xì)胞系SK—3rd球囊細(xì)胞中l(wèi)et—7 microRNA的表達(dá)水平能否增加其對(duì)表阿霉素的敏感性。 方法：

7、以let—7a mimics轉(zhuǎn)染let—7 microRNA幾乎不表達(dá)的SK—3rd球囊細(xì)胞，采用real—time RT—PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后的SK—3rd球囊細(xì)胞中l(wèi)et—7的表達(dá)水平的變化、western blot方法檢測(cè)let—7靶蛋白H—RAS、HMGA2的表達(dá)水平的變化以驗(yàn)證let—7能否成功轉(zhuǎn)染SK—3rd球囊細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用。采用MTT法和流式細(xì)胞術(shù)，檢測(cè)轉(zhuǎn)染let—7a mimics前后SK—3rd球囊細(xì)胞對(duì)表

8、阿霉素敏感性的變化。 結(jié)果： 經(jīng)過let—7a mimics轉(zhuǎn)染后，SK—3rd球囊細(xì)胞中l(wèi)et—7表達(dá)水平提高，細(xì)胞中l(wèi)et—7的靶蛋白H—RAS和HMGA2的表達(dá)水平明顯降低，表明let—7a mimics能夠成功轉(zhuǎn)染SK—3rd球囊細(xì)胞并在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用。相對(duì)于陰性對(duì)照組，表阿霉素對(duì)let—7a mimics轉(zhuǎn)染后的SK—3rd球囊細(xì)胞細(xì)胞活力抑制作用增強(qiáng)，表阿霉素對(duì)let—7a mimics轉(zhuǎn)染后的SK—3rd球