CGRP對(duì)骺板生長(zhǎng)發(fā)育影響及其調(diào)控機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：脊椎動(dòng)物骨骼的形態(tài)與大小因功能各異而相差懸殊，但多數(shù)骨骼卻是以相同的生長(zhǎng)方式-軟骨內(nèi)成骨-長(zhǎng)成的。骺生長(zhǎng)板（簡(jiǎn)稱骺板）作為長(zhǎng)骨生長(zhǎng)代謝活躍區(qū)域，是軟骨內(nèi)成骨的主要發(fā)生部位，其生長(zhǎng)發(fā)育對(duì)肢體發(fā)育有重要作用。研究表明，降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）作為一種重要神經(jīng)肽，參與了骨折愈合的修復(fù)重建。臨床發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)癱患兒患肢發(fā)育明顯較健側(cè)短小畸形、骨質(zhì)疏松，但周圍神經(jīng)對(duì)骨骼生長(zhǎng)發(fā)育影響及調(diào)控機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
　　 本研究通過建立幼兔坐

2、骨神經(jīng)、股神經(jīng)損傷的動(dòng)物模型，然后通過多種物理檢查及鏡下觀察的方法，比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間脛骨骺板生長(zhǎng)發(fā)育情況差異。并通過探討周圍神經(jīng)損傷后，以CGRP為代表的神經(jīng)肽對(duì)脛骨骺板生長(zhǎng)發(fā)育的影響及其可能的調(diào)控機(jī)制，為從改善神經(jīng)功能入手來促進(jìn)幼兒及青少年周圍神經(jīng)損傷者患肢生長(zhǎng)發(fā)育提供理論依據(jù)。
　　 方法：選用健康的4～6周齡新西蘭大耳白兔40只，雌雄不限，體重1.0～1.4kg。采用同體對(duì)照法，將左側(cè)股神經(jīng)、坐骨神經(jīng)切除1cm作為實(shí)

3、驗(yàn)組；右側(cè)不切除股神經(jīng)、坐骨神經(jīng)作為對(duì)照組。
　　 術(shù)后將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物置于籠內(nèi)，動(dòng)物飼養(yǎng)選用標(biāo)準(zhǔn)飼料統(tǒng)一喂養(yǎng)，注意保溫，術(shù)后連續(xù)三天肌肉注射青霉素1萬單位/kg體重，每日2次，并應(yīng)用碘伏隔日消毒傷口，預(yù)防傷口感染。分別在術(shù)后第1、2、4、8周隨機(jī)抽取8只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，空氣栓塞處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，進(jìn)行觀察：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死前行X線攝像，觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物X線下雙側(cè)脛骨的變化，測(cè)量雙側(cè)脛骨角并進(jìn)行對(duì)比；處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后，去除膝關(guān)節(jié)、踝關(guān)節(jié)周圍附著的肌肉及關(guān)節(jié)

4、囊，保留完整的脛骨，游標(biāo)卡尺測(cè)量雙側(cè)脛骨的長(zhǎng)度并進(jìn)行對(duì)比；隨后置于雙能X線骨密度儀下測(cè)量，以脛骨干骺端為中心，對(duì)比進(jìn)行干骺端骨密度檢測(cè)；將脛骨近端包括骨骺、骺板、干骺端一同取出分別行光鏡檢查，評(píng)價(jià)骺板軟骨內(nèi)成骨骨形成及發(fā)育情況。整理數(shù)據(jù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，得出統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)論。
　　 結(jié)果：
　　 1.影像學(xué)檢查分別于脛骨正位X線片下，測(cè)量脛骨角，結(jié)果表明：術(shù)后1周實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組脛骨角分別為90.78±2.53°、91.43±2

5、.60°，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）；術(shù)后2周實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組分別為87.43±1.05°、89.39±2.20°，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.05）；術(shù)后4、8周結(jié)果均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義、且有顯著性差異（P<0.01）。
　　 2.脛骨長(zhǎng)度測(cè)量游標(biāo)卡尺測(cè)量雙側(cè)脛骨的長(zhǎng)度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：術(shù)后1周實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組脛骨長(zhǎng)度分別為93.96±1.78mm、95.01±1.85mm，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）；術(shù)后2周實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組分別為96.15

6、±1.70mm、100.00±3.83mm，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.05）；術(shù)后4、8周結(jié)果均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義、且有顯著性差異（P<0.01）。
　　 3.脛骨干骺端骨密度測(cè)定
　　 取出雙側(cè)脛骨剝?nèi)ス侵車能浗M織，以脛骨近端干骺端為中心，置于雙能X線骨密度儀掃描下測(cè)量：術(shù)后1周實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組干骺端骨密度分別為0.121±0.018g/c㎡、0.127±0.016g/c㎡，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）；術(shù)后2周實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組分

7、別為0.141±0.026g/c㎡、0.164±0.013g/c㎡，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.05）；術(shù)后4、8周結(jié)果均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義、且有顯著性差異（P<0.01）。
　　 4.光鏡進(jìn)行組織學(xué)觀察：光鏡下，對(duì)照組術(shù)后1、2、4周骺生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞增殖分化明顯，結(jié)構(gòu)層次清楚，依長(zhǎng)骨的軸向縱向堆積呈柵欄狀排列整齊；8周軟骨細(xì)胞增殖分化減慢，仍可見軟骨繼續(xù)骨化。干骺端成骨區(qū)可見大量新生骨小梁，順應(yīng)力方向呈縱向排列，骨小梁排列粗大，規(guī)則且逐漸

8、密集，周邊大量成骨細(xì)胞均勻排列，礦化類骨質(zhì)堆積明顯。而實(shí)驗(yàn)組術(shù)后1、2、4周骺生長(zhǎng)板靜止軟骨區(qū)相對(duì)擴(kuò)大，增殖肥大區(qū)相對(duì)縮小，結(jié)構(gòu)層次排列紊亂，軟骨細(xì)胞增殖分化進(jìn)行性減少；8周軟骨細(xì)胞排列嚴(yán)重紊亂，軟骨細(xì)胞增殖肥大層不明顯，軟骨內(nèi)化骨停滯（骺板早閉）。成骨區(qū)骨小梁逐漸稀疏，細(xì)小，排列不規(guī)則，骨髓腔擴(kuò)大，可見大量破骨細(xì)胞，未礦化類骨質(zhì)大量堆積。
　　 5.CGRP免疫組化染色觀察，對(duì)照組術(shù)后1、2、4周骺板均可見大量CGRP陽性表達(dá)

9、，呈團(tuán)塊狀散在均勻分布，染色呈深棕色；術(shù)后8周陽性表達(dá)相對(duì)減少，染色呈棕黃色。而術(shù)后1周實(shí)驗(yàn)組骺板組織中可見少許CGRP陽性表達(dá)，呈散在點(diǎn)狀分布，分布稀疏，染色呈淺棕黃色；術(shù)后2、4、8周實(shí)驗(yàn)組骺板中僅有極低水平的CGRP表達(dá)，進(jìn)行性減少，染色呈淺黃色或淡黃色。
　　 結(jié)論：
　　 1.周圍神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)骨骼生長(zhǎng)發(fā)育起重要調(diào)節(jié)作用，骺板生長(zhǎng)發(fā)育過程中CGRP的分布與骨代謝能力密切相關(guān)，表明，CGRP在骺板發(fā)育過程中發(fā)揮重要作

10、用。
　　 2.CGRP作為一種主要神經(jīng)肽，對(duì)骺板生長(zhǎng)發(fā)育具有重要調(diào)控作用，CGRP通過復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)系統(tǒng)發(fā)揮其調(diào)控作用，但該網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)中各因素之間的協(xié)調(diào)/拮抗作用尚待進(jìn)一步研究。
　　 3.周圍神經(jīng)損傷后，骺板局部CGRP等神經(jīng)肽分布減少，影響骺板正常發(fā)育，導(dǎo)致肢體短小畸形、骨質(zhì)疏松。因此，恢復(fù)神經(jīng)支配是骨骼發(fā)育所必需的。
　　 4.幼兒及青少年周圍神經(jīng)損傷者，應(yīng)盡早探查或修復(fù)周圍神經(jīng)，恢復(fù)肢體的神經(jīng)支配，以免延