不同潮氣量機(jī)械通氣后大鼠支氣管肺泡灌洗液內(nèi)HSP70水平和肺損傷關(guān)系的研究.pdf

1、目的:研究支氣管肺泡灌洗液中熱休克蛋白70(HSP-70)、細(xì)胞因子在機(jī)械通氣肺損傷中的作用機(jī)制。觀察不同潮氣量機(jī)械通氣后大鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)內(nèi)熱休克蛋白(HSP-70)含量的變化;觀察不同潮氣量機(jī)械通氣后BALF內(nèi)細(xì)胞因子白介素6(IL-6)、巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)含量的變化,及其與BALF內(nèi)熱休克蛋白(HSP-70)含量的關(guān)系;觀察不同潮氣量機(jī)械通氣后肺組織的肺損傷評分和凋亡指數(shù),及其與BALF內(nèi)熱休克蛋白(H

2、SP-70)含量的關(guān)系。
　　方法:雄性SD大鼠36只,隨機(jī)分為3組,大潮氣量機(jī)械通氣組(HV)、小潮氣量機(jī)械通氣組(LV)、正常對照組(N)。大鼠麻醉后,頸部皮膚消毒后行氣管切開插管固定,并以電熱墊維持大鼠體溫在37攝氏度左右。HV組,LV組均連接小動物呼吸機(jī)以行機(jī)械通氣;N組保留自主呼吸室內(nèi)空氣,單籠飼養(yǎng)。HV、LV組潮氣量(Vt)值分別為25ml/kg,7mL/kg,通氣時間4h,吸呼比1:2。10％水合氯醛(0.3mL/k

3、g)腹腔注射麻醉后,每半小時追加首劑的1/3,維持大鼠麻醉狀態(tài)。在機(jī)械通風(fēng)后,處死大鼠用生理鹽水肺灌洗。收集的BALF經(jīng)離心后,上清液分裝保存在-80℃冰箱中以供將來使用。(1)BALF離心后,沉渣重新懸后,光學(xué)顯微鏡下用細(xì)胞計數(shù)板行白細(xì)胞計數(shù),及涂片瑞氏染色后行白細(xì)胞分類計數(shù);(2)采用BCA方法測定大鼠BALF中總蛋白質(zhì)濃度的含量;采用ELISA方法測定大鼠BALF中HSP-70和IL-6、MIP-2的含量;(3)肺組織石蠟切片后行

4、蘇木素-伊紅(HE)染色,光鏡下觀察病理學(xué)變化及行肺損傷評分,評估肺組織的損傷程度;(4)采用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記測定法(TUNEL法)檢測肺組織石蠟切片的細(xì)胞凋亡情況,評估肺組織細(xì)胞的凋亡指數(shù)。
　　結(jié)果:1.與正常對照組比較,小潮氣量機(jī)械通氣組和大潮氣量機(jī)械通氣組大鼠BALF中白細(xì)胞計數(shù)及中性粒細(xì)胞分類計數(shù)均顯著性升高(P<0.05)。2.與正常對照組比較,小潮氣量機(jī)械通氣組和大潮氣量機(jī)械通氣組大鼠B

5、ALF中HSP-70、IL-6、MIP-2水平以及肺損傷病理評分、肺凋亡指數(shù)均顯著性升高(P<0.05)。3.與小潮氣量機(jī)械通氣組比較,大潮氣量機(jī)械通氣組大鼠BALF中HSP-70、IL-6、MIP-2的水平以及肺損傷病理評分、肺凋亡指數(shù)也均顯著性升高(P<0.05)。4.大潮氣量機(jī)械通氣組大鼠BALF中IL-6、MIP-2以及肺損傷病理評分別與HSP-70呈顯著正相關(guān)(P=0.01,r=0.8538;P=0.01,r=0.8919;P

6、=0.01,r=0.8852)。
　　結(jié)論:1)大潮氣量機(jī)械通氣可致肺上皮細(xì)胞損傷或壞死增加,HSP-70釋放到氣道內(nèi)的量明顯增加,促進(jìn)細(xì)胞因子釋放;而肺內(nèi)炎癥反應(yīng)顯著增強(qiáng),可能進(jìn)一步加重肺組織的損傷及細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
　　2)小潮氣量機(jī)械通氣相對大潮氣量機(jī)械通氣,肺上皮細(xì)胞損傷或壞死程度較輕,HSP-70胞外釋放及細(xì)胞因子較少,肺內(nèi)炎癥反應(yīng)較輕,細(xì)胞凋亡少。
　　3)因此機(jī)械通氣時,機(jī)械牽拉造成肺組織細(xì)胞的損傷,細(xì)胞