玉米彎孢霉葉斑病菌Clm1基因的克隆與功能分析.pdf

1、玉米彎孢霉葉斑病是一種主要由新月彎孢霉Curvularia lunata（Wakker） Boedijn所引起的玉米葉部真菌性病害，其在我國玉米產(chǎn)區(qū)分布十分廣泛。目前，人們對于該病害致病分子機理領(lǐng)域的研究尚未深入，因而進行此方面的研究對于深刻揭示該病原真菌致病性機制以及防控該種病害的發(fā)生、發(fā)展均具有十分重要的意義?，F(xiàn)已知作為生物體內(nèi)信號傳遞主要功能因子之一的MAPK在病原真菌致病性方面承擔(dān)著重要的作用。為此，本文以玉米彎孢霉葉斑病菌MA

2、PK基因之一的Clm1基因作為對象來進行一系列的研究。
　　主要采取Inverse PCR和RACE技術(shù)從玉米彎孢霉葉斑病菌中克隆獲得了該基因的全序列及其所在區(qū)域的旁側(cè)序列，該基因DNA全長1.609kb，cDNA全長1.251kb（GenBank：HQ851366），包含6個內(nèi)含子，與釀酒酵母中參與細胞壁完整性途徑的Slt2基因同源。同時通過構(gòu)建該基因5’非編碼區(qū)與eGFP融合表達載體，轉(zhuǎn)化自身出發(fā)菌株，確定了其為Clm1基因的

3、啟動子序列，進一步驗證了該基因ORF框的正確性。為分析Clm1基因的功能，運用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的靶基因定向敲除技術(shù)成功對其進行了敲除。比較Clm1基因敲除突變株與野生型菌株后發(fā)現(xiàn)敲除突變株表現(xiàn)為：分生孢子總產(chǎn)量明顯下降，其中變形孢子數(shù)比例上升；菌落和分生孢子色澤變淺，色素形成相關(guān)基因Brn1的表達下降；菌絲外層細胞壁基本缺失；侵染離體葉片的能力存在明顯下降；纖維素酶活性和毒素化合物產(chǎn)生水平均發(fā)生改變，同時發(fā)現(xiàn)Clm1基因與毒素相關(guān)基因Cl