Vanin-1基因在免疫性血小板減少癥中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:免疫性血小板減少癥(Idiopathicthrombocytopenicpurpura,ITP)是一種常見的獲得性自身免疫性疾病。目前關(guān)于ITP發(fā)病機(jī)制的研究很多,包括自身抗體介導(dǎo)的血小板減少及巨核細(xì)胞的異常,細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用,B淋巴細(xì)胞激活因子(BAFF)過度表達(dá),協(xié)同刺激分子的作用等,也有研究表明氧化應(yīng)激與ITP的發(fā)病相關(guān),隨著分子生物學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)等的發(fā)展,在基因?qū)用嫔涎芯縄TP的發(fā)病機(jī)制已然具有重要的意義。

2、r>　　 在自身免疫性疾病中,活性氧和活性氮作用產(chǎn)生的抗原決定簇可能會導(dǎo)致抗原表位的播散。氧化應(yīng)激產(chǎn)生的自由基超出機(jī)體清除能力時(shí)會對體內(nèi)的蛋白、脂質(zhì)、DNA等進(jìn)行修飾,從而導(dǎo)致了自身抗體的產(chǎn)生,或者直接對機(jī)體組織細(xì)胞產(chǎn)生損害,而導(dǎo)致了疾病的發(fā)生。
　　 在表皮細(xì)胞,氧化應(yīng)激相關(guān)基因(Vanin-1基因)已被證實(shí)是一種氧化應(yīng)激感受器,它能調(diào)整內(nèi)源性谷胱甘肽的水平,影響氧化還原狀態(tài),從而導(dǎo)致疾病的發(fā)生。已有實(shí)驗(yàn)研究表明,兒童慢性I

3、TP患者體內(nèi)Vanin-1基因表達(dá)增高,同時(shí)血漿中還原型谷胱甘肽與氧化型谷胱甘肽的比值(GSH/GSSG)降低,從而推測Vanin-1基因的表達(dá)增高在區(qū)分兒童急慢性ITP的發(fā)病中起到一定作用。本實(shí)驗(yàn)通過檢測Vanin-1基因在成人ITP中的表達(dá)情況及測定ITP患者血漿中還原型谷胱甘肽與氧化型谷胱甘肽的比值(GSH/GSSG),來探討Vanin-1的表達(dá)與ITP發(fā)病的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1、本實(shí)驗(yàn)收集了2012.4

4、-2013.1部分在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院血液內(nèi)科住院的ITP病人的血液標(biāo)本,將其分為初治組54例、復(fù)發(fā)組19例、正常對照組30例,其中初治組按治療前后(治療后患者達(dá)完全反應(yīng))又分為治療前組(54例)和治療后組(49例),復(fù)發(fā)組也按治療前后(治療后患者血小板再次升至正常達(dá)CR)分為復(fù)發(fā)治療前組(19例)和復(fù)發(fā)治療后組(19例),在49例治療后達(dá)CR的病人中按照治療方法的不同,將其分為聯(lián)合治療組(靜注人免疫球蛋白(0.4g/kg/d)加標(biāo)量

5、糖皮質(zhì)激素(強(qiáng)的松1mg/kg/d))22例和激素治療組(強(qiáng)的松5mg/kg/d)27例。
　　 2、每例取2.5ml外周血,使用淋巴細(xì)胞分離液提取單個核細(xì)胞。
　　 3、應(yīng)用實(shí)時(shí)免疫熒光定量-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-timefluorescencequantitativepcr)的技術(shù)檢測各組Vanin-1基因的表達(dá)水平。
　　 4、并收集以上標(biāo)本的血漿應(yīng)用谷胱甘肽試劑盒通過分光光度法進(jìn)行還原型谷胱甘肽與氧化

6、型谷胱甘肽的比值(GSH/GSSG)的測定。
　　 5、試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理,應(yīng)用兩個獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或兩個獨(dú)立樣本秩和檢驗(yàn)來進(jìn)行兩兩比較或做參數(shù)檢驗(yàn),將α=0.05作為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果:
　　 1、Vanin-1基因在初治組、復(fù)發(fā)組及正常對照組的相對表達(dá)情況
　　 在54例初治組ITP患者中,Vanin-1基因的相對表達(dá)水平為4.864±1.471,正常對照組Vanin

7、-1基因的相對表達(dá)水平為1.016±0.170,與正常對照組相比初治組Vanin-1基因表達(dá)升高,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000＜0.05);19例復(fù)發(fā)組ITP患者的Vanin-1基因的相對表達(dá)水平為4.261±1.021,與正常對照組相比Vanin-1基因表達(dá)升高,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000＜0.05);治初組與復(fù)發(fā)組相比差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.228＞0.05)。
　　 2、GSH/GSSG在初治組、復(fù)發(fā)組及正

8、常對照組中的情況
　　 在54例初治組ITP患者中,GSH/GSSG的比值為1.579±0.369,正常對照組GSH/GSSG的比值為9.989±1.065,兩者相比差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000＜0.05);19例復(fù)發(fā)組ITP患者的GSH/GSSG的比值為1.723±0.565,與正常對照組相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000＜0.05);初治組與復(fù)發(fā)組相比差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.446＞0.05)。
　　 3、

9、Vanin-1基因在初治組、復(fù)發(fā)組治療前及治療達(dá)CR后與正常對照組的表達(dá)變化情況
　　 在54例初治ITP患者中,治療前Vanin-1基因的相對表達(dá)水平為4.864±1.471,49例治療達(dá)CR后Vanin-1基因的相對表達(dá)水平為1.154±0.219,治療前后相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000＜0.05),治療后與正常對照組相比差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.132＞0.05);在19例復(fù)發(fā)ITP患者中,治療前Vanin-1基因的

10、相對表達(dá)水平為4.261±1.021,19例治療達(dá)CR后Vanin-1基因的相對表達(dá)水平為1.243±0.475,治療前后相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000＜0.05),治療后與正常對照組相比差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.147＞0.05)。
　　 4、GSH/GSSG在初治組、復(fù)發(fā)組治療前及治療達(dá)CR后與正常對照組的變化情況
　　 在54例初治ITP患者中GSH/GSSG的比值為1.579±0.369,49例治療達(dá)CR后

11、GSH/GSSG的比值為9.754±1.219,治療前與治療后相比是降低的,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000＜0.05),治療后與正常對照組相比差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.246＞0.05);在19例復(fù)發(fā)ITP患者中GSH/GSSG的比值為1.723±0.565,治療達(dá)CR后GSH/GSSG的比值為10.143±1.435,治療前與治療后相比是降低的,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000＜0.05),治療后與正常對照組相比差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

12、P=0.213＞0.05)。
　　 5、不同方法治療后Vanin-1基因的相對表達(dá)水平的差異
　　 在初治治療達(dá)CR后的49例患者中,我們按照不同的治療方法將其分為聯(lián)合治療組(靜注人免疫球蛋白(0.4g/kg/d)加標(biāo)量糖皮質(zhì)激素(強(qiáng)的松1mg/kg/d))22例和激素治療組(強(qiáng)的松5mg/kg/d)27例,結(jié)果顯示聯(lián)合治療組Vanin-1基因的相對表達(dá)水平為1.145±0.195,激素治療組Vanin-1基因的相對表達(dá)

13、水平為1.257±0.397,應(yīng)用不同方法治療后患者Vanin-1基因的表達(dá)水平差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.291＞0.05)。
　　 6、初治ITP患者按性別、年齡分別分組,Vanin-1在各組中的表達(dá)情況
　　 初治ITP患者中女性38例,Vanin-1基因的相對表達(dá)水平為4.753±1.286,男性16例Vanin-1基因的相對表達(dá)水平為4.834±1.249,兩組相比Vanin-1基因相對表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=

14、0.232＞0.05),年齡≥60歲者14例,Vanin-1基因的相對表達(dá)水平為4.792±1.065,年齡＜60歲者40例,Vanin-1基因的相對表達(dá)水平為4.861±1.219,兩者比較Vanin-1基因相對表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.142＞0.05)。
　　 7、初治ITP患者血小板計(jì)數(shù)與Vanin-1的表達(dá)情況
　　 對初治ITP患者外周血血小板計(jì)數(shù)與Vanin-1基因的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)果顯示兩者

15、之間無相關(guān)性(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、初治組及復(fù)發(fā)組ITP患者的Vanin-1基因的表達(dá)水平均高于正常對照組,并且在治療有效后Vanin-1基因的表達(dá)水平又降低。提示Vanin-1基因可能參與了ITP的發(fā)病過程,為探討ITP的發(fā)病機(jī)制提供了理論依據(jù)。
　　 2、初治組及復(fù)發(fā)組ITP患者血漿中GSH/GSSG比值明顯低于正常對照組,而在治療有效后比值又升高,提示在ITP患者體內(nèi)存在氧化應(yīng)激狀態(tài),且