FMR1基因突變?cè)谥袊?guó)大陸PD人群中的研究與分析.pdf

1、背景和目的：
　　帕金森病（PD）是一種多發(fā)于中老年人群的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，發(fā)病率在65歲以上老年人群中高達(dá)1.7％，其發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚，目前認(rèn)為遺傳因素在其中發(fā)揮了重要作用。在脆性X智力低下1號(hào)基因（fragile X mental retardation1，F(xiàn)MR1）的5’端非編碼區(qū)有一個(gè)不穩(wěn)定的CGG三核苷酸串聯(lián)重復(fù)序列，根據(jù)此序列中CGG的重復(fù)擴(kuò)增（CGG repeat expansions，CGGs）次數(shù)，可以將

2、FMR1基因分為4種類型。近來有文獻(xiàn)報(bào)道，其中的兩種類型—前突變（premutation，PM）基因（55-200 CGGs）和灰色區(qū)（grayzone，GZ）基因（40-54 CGGs）可能與PD相關(guān)。但上述相關(guān)性的具體內(nèi)在機(jī)制目前仍不清楚，目前推測(cè)可能是“毒性RNA”機(jī)制。值得注意的是上述報(bào)道的研究對(duì)象大都局限于高加索人群，關(guān)于亞洲的相關(guān)資料很少，特別是在中國(guó)大陸人群中，目前尚沒有相關(guān)的研究報(bào)道。本研究擬對(duì)中國(guó)大陸PD人群及正常人群

3、進(jìn)行FMR1基因突變檢測(cè)，對(duì)PD病人中所篩查出的FMR1突變基因攜帶者的臨床特點(diǎn)進(jìn)行分析，并進(jìn)一步利用限制性酶切技術(shù)結(jié)合基因合成技術(shù)構(gòu)建FMR1灰色區(qū)基因以及正?；虻恼婧吮磉_(dá)質(zhì)粒，以便于在此基礎(chǔ)上對(duì)FMR1灰色區(qū)基因的功能進(jìn)行進(jìn)一步的分析。旨在了解中國(guó)大陸PD人群中FMR1基因突變的特點(diǎn)及其與臨床表型的關(guān)系，并對(duì)FMR1基因突變與PD發(fā)病機(jī)制之間的可能關(guān)系進(jìn)行探討。
　　方法：
　　1、研究對(duì)象包括患者組與對(duì)照組：患者組為

4、福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院、溫州醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院的門診或住院的PD患者，共360例（男213例，女147例），并排除有PD家族史的患者。患者組包括14例非典型PD病例（均有一定程度的PD癥狀表現(xiàn)，其中7例對(duì)左旋多巴沒有反應(yīng)或反應(yīng)不明顯，3例有腦卒中的病史并表現(xiàn)有單側(cè)肢體病理征陽性，但這并不能解釋其對(duì)側(cè)肢體的PD癥狀，2例有共濟(jì)失調(diào)的表現(xiàn)，還有2例可能處于PD早期而尚未達(dá)到PD的診斷標(biāo)準(zhǔn)，其余患者均經(jīng)過2位副主任以上醫(yī)師根據(jù)英國(guó)帕金森病協(xié)

5、會(huì)腦庫(kù)診斷標(biāo)準(zhǔn)診為原發(fā)性PD。對(duì)照組為福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院門診健康體檢者，共295名（男173例，女122例）。
　　2、利用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)結(jié)合瓊脂糖凝膠電泳、變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）及DNA測(cè)序技術(shù)在所有研究對(duì)象中檢測(cè)FMR1基因突變并確定其CGGs重復(fù)次數(shù)。
　　3、詳細(xì)記錄本實(shí)驗(yàn)的所有研究對(duì)象的各種資料，結(jié)合FMR1基因突變篩查所得結(jié)果，對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)以及研究對(duì)象的各種臨床資料進(jìn)行比較分析。

6、>　　4、利用限制性酶切技術(shù)結(jié)合基因合成技術(shù)構(gòu)建FMR1灰色區(qū)基因以及正?；虻恼婧吮磉_(dá)質(zhì)粒。
　　結(jié)果：
　　1、在患者組與對(duì)照組中均沒有發(fā)現(xiàn)FMR1前突變基因或全突變基因（>200 CGGs）。
　　2、在患者組中發(fā)現(xiàn)了11例灰色區(qū)基因攜帶者，而在對(duì)照組中僅發(fā)現(xiàn)了1例灰色區(qū)基因攜帶者，而且11例灰色區(qū)基因攜帶者中有10例是女性，這在所有147例女性 PD病人中占6.8%，而在女性對(duì)照者中沒有發(fā)現(xiàn)灰色區(qū)基因攜帶者（P

7、<0.05）。
　　3、FMR1基因突變檢測(cè)結(jié)果在男性患者組與男性對(duì)照組中沒有發(fā)現(xiàn)明顯的差別（P>0.05）。
　　4、患者組中的10例女性灰色區(qū)基因攜帶者中有一例尚未絕經(jīng)，其他9例絕經(jīng)期均在正常范圍,沒有發(fā)現(xiàn)任何與卵巢早衰（POF）相關(guān)的臨床表現(xiàn)。
　　5、患者組中的10例女性灰色區(qū)基因攜帶者中有一例其頭顱MRI表現(xiàn)出腦橋部位輕微的白質(zhì)高信號(hào)影。
　　6、本研究應(yīng)用限制性酶切技術(shù)結(jié)合基因合成技術(shù)成功構(gòu)建了兩個(gè)F

8、MR1基因真核表達(dá)質(zhì)粒：(CGG)44-FMR1 cDNA/PEGFP/N1和FMR1 cDNA/PEGFP/N1，并且已經(jīng)經(jīng)過酶切和測(cè)序驗(yàn)證。
　　結(jié)論：
　　1、在中國(guó)大陸地區(qū)，F(xiàn)MR1灰色區(qū)基因可能與PD有相關(guān)性，而且這種相關(guān)性僅存在于女性病人。
　　2、在中國(guó)大陸女性PD人群中，F(xiàn)MR1灰色區(qū)基因可能與POF無關(guān)。
　　3、本研究已成功構(gòu)建了兩個(gè)FMR1灰色區(qū)基因真核表達(dá)質(zhì)粒，有助于后續(xù)開展針對(duì)明確FMR