毛細(xì)管電泳法對幾種手性抗組胺藥物的分析應(yīng)用.pdf

1、毛細(xì)管電泳(capillary Electrophoresis,CE)又稱之為高效毛細(xì)管電泳(HighPerformance capillary Electrophoresis,HPCE),是近年來發(fā)展較為迅速的一種分離分析技術(shù),是20世紀(jì)80年代分析領(lǐng)域中最有影響的分支學(xué)科之一,是繼高效液相色譜(HPLC)之后的又一重大進(jìn)展。激光誘導(dǎo)熒光(LIF)檢測器具有背景信號低,樣品用量少等優(yōu)勢,是毛細(xì)管電泳(CE)中最靈敏的檢測方法之一。

2、r>　　毛細(xì)管電泳-激光誘導(dǎo)熒光法(CE-LIF)的應(yīng)用范圍廣泛,包括環(huán)境、食品、臨床分析、多肽和蛋白質(zhì)分析等。
　　本論文主要研究了以下兩方面的內(nèi)容:
　　1.采用毛細(xì)管電泳法對幾種抗組胺藥物的手性拆分進(jìn)行了研究,主要有撲爾敏、卡比沙明、二氧丙嗪、多西拉敏、奧索馬嗪、鹽酸羥嗪、西替利嗪。考察了影響拆分的幾個因素:(1)手性選擇劑種類對拆分的影響:考察了β-CD,γ-CD,CM-β-CD,HP-β-CD,Tri-OMe-β-

3、CD,DM-β-CD這幾種手性選擇劑對抗組胺藥物的拆分影響。結(jié)果表明CM-β-CD作為手性選擇劑對五個抗組胺藥物的手性分離效果較好。(2)手性選擇劑濃度對拆分的影響:手性選擇劑的濃度也是影響對映體分離的一個重要因素。本實驗考察了濃度為5-15 mmol/L范圍內(nèi)的CM-β-CD對抗組胺類藥物的手性拆分影響。實驗結(jié)果表明,當(dāng)CM-β-CD濃度在5-15 mmol/L范圍內(nèi),隨濃度增大,分離度逐漸增大,但是分離時間也逐漸變長,綜合考慮分離度

4、和分析時間的因素,確定CM-β-CD的最佳分離濃度為10 mmol/L。(3)運行緩沖液pH值對拆分的影響:考察了pH值分別為3.0,3.5,4.0,4.8,5.5,6.3的緩沖液對抗組胺類藥物手性拆分影響。結(jié)果表明,本次實驗撲爾敏和奧索馬嗪的最佳pH值為3.5,卡比沙明、二氧丙嗪和多西拉敏的最佳pH值均為4.8。(4)電壓對拆分的影響:考察了不同電壓對拆分的影響。結(jié)果:電壓對分離度和分析時間都有影響,綜合考慮兩方面的影響,確定分離電壓

5、分別為:撲爾敏20kV,卡比沙明20kV,奧索馬嗪12kV,多西拉敏16kV,二氧丙嗪12kV。(5)柱溫對拆分的影響:考察了柱溫對拆分的影響。柱溫不僅影響遷移時間,還影響環(huán)糊精與對映體之間的包結(jié)絡(luò)合平衡。綜合考慮,確定柱溫分別是:撲爾敏25℃,卡比沙明25℃,奧索馬嗪16℃,多西拉敏16℃,二氧丙嗪16℃。
　　2.采用異硫氰酸熒光素(FITC)作為衍生化試劑,將鹽酸索他洛爾進(jìn)行衍生化,采用毛細(xì)管電泳-激光誘導(dǎo)熒光(CE-LIF

6、)檢測方法檢測衍生化后的產(chǎn)物。分別考察了四種堿性溶液(50 mmol/L的硼砂溶液,0.01 mol/L的NaOH溶液,200 mmol/L的碳酸鹽溶液,200 mmol/L的磷酸氫二鈉)對衍生化反應(yīng)的影響。實驗結(jié)果證明,在硼砂溶液中的衍生化結(jié)果較好,干擾最少,檢測信號最強,能夠明顯看到衍生化的的產(chǎn)物峰。但在其它三種緩沖液中的衍生化后產(chǎn)物有較多的干擾。此外還考察了2-24h內(nèi)的衍生時間對衍生化反應(yīng)的影響;考察了衍生溫度以及毛細(xì)管電泳分離