2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、目的: 研究鉛對(duì)仔鼠海馬和大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞中酸敏感離子通道(acid-sensingion channel,ASIC)1a、2a和2b mRNA和蛋白表達(dá)的影響,探討鉛神經(jīng)毒作用的分子機(jī)制,為鉛中毒的防制工作提供理論依據(jù)。 方法: 1.鉛對(duì)仔鼠生長(zhǎng)發(fā)育及海馬組織中ASIC1a、2a和2b表達(dá)的影響 孕鼠隨機(jī)分為去離子水對(duì)照組、0.2%和1.0%醋酸鉛(Pb(Ac)2)組,自孕第0d起以自由飲水染鉛。幼鼠

2、出生后,記錄各組仔鼠數(shù)以及體重和身長(zhǎng)。之后經(jīng)哺乳染鉛,斷乳后則自行飲用與其母鼠濃度相同的含鉛水。出生后(PN)8d和50d分別處死仔鼠,原子吸收光譜法測(cè)定腦鉛含量,RT-PCR和Western blot法分別觀察各組仔鼠海馬中ASIC1a、2a和2b的mRNA和蛋白的表達(dá)情況。 2.鉛對(duì)C6細(xì)胞損傷和對(duì)細(xì)胞內(nèi)ASIC1a、2a和2b表達(dá)的影響 正常培養(yǎng)大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞,按0.5μmol/L、5μmol/L、50μmol

3、/L、500μmol/L、1000μmol/L Pb(Ac)2組和生理鹽水對(duì)照組,以MTT實(shí)驗(yàn)觀察鉛對(duì)C6細(xì)胞存活率的影響,LDH釋放實(shí)驗(yàn)觀察鉛對(duì)C6細(xì)胞的損傷作用;之后按5μmol/L、50μmol/L、1000μmol/L,Pb(Ac)2組和生理鹽水對(duì)照組染毒細(xì)胞24h,以流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)鉛致細(xì)胞凋亡情況,Real-time PCR和RT-PCR方法檢測(cè)各組細(xì)胞中ASIC1a、2a和2b的mRNA表達(dá)水平,RT-PCR方法檢測(cè)各組細(xì)胞

4、中蛋白激酶C(PKC)和鈣調(diào)蛋白(CaM)的mRNA表達(dá)水平,Western blot檢測(cè)細(xì)胞中ASIC1a、2a、2b、PKC、CaM的蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果: 1.鉛對(duì)仔鼠生長(zhǎng)發(fā)育和海馬組織中ASIC1a、2a和2b表達(dá)的影響 (1)各組間仔鼠數(shù)量比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),對(duì)照組、0.2%和1.0%Pb(Ac)2組仔鼠的體重和身長(zhǎng)逐漸降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 (2)0.2%

5、、1.0%Pb(Ac)2組PN8d和50d仔鼠的腦鉛含量均高于相應(yīng)對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);同劑量組仔鼠PN50d腦鉛含量高于PN8d(P<0.01)。 (3)PN8d和PN50d的1.0%Pb(Ac)2組仔鼠海馬的ASIC1a mRNA相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組(P<0.01),0.2%和1.0%Pb(Ac)2組仔鼠海馬ASIC1a蛋白相對(duì)表達(dá)量均低于相應(yīng)的對(duì)照組(P<0.01,P<0.05);PN8d和PN50d

6、的0.2%、1.0%Pb(Ac)2組仔鼠海馬.ASIC2a、ASIC2b的mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量與相應(yīng)對(duì)照組比較,差異均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。上述結(jié)果均由三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)證明。 2.鉛對(duì)C6細(xì)胞的損傷作用和對(duì)細(xì)胞內(nèi)ASIC1a、2a和2b表達(dá)的影響 (1)MTT結(jié)果顯示,細(xì)胞存活率隨染鉛劑量的增加而降低(P<0.01);LDH釋放率隨染鉛劑量的增加而增加(P<0.01);細(xì)胞凋亡率有隨劑量增加的趨勢(shì),但與對(duì)照組的

7、差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 (2)1000μmol/L,Pb(Ac)2組ASIC1a mRNA的表達(dá)較對(duì)照組升高(P<0.01);各劑量組ASIC2a和ASIC2b mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組相比,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);50μmol/L和1000μmol/L Pb(Ac)2組C6細(xì)胞的ASIC1a蛋白表達(dá)較對(duì)照組降低(P>0.01),并呈隨染鉛劑量增加而降低的趨勢(shì);鉛不影響ASIC2a和ASIC2b蛋白的表

8、達(dá)(P>0.05)。 (3)自5μmol/L Pb(Ac)2組開始,PKC和CaM mRNA和蛋白表達(dá)水平隨劑量增加而降低(P<0.05,P<0.01)。 結(jié)論: 1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示,對(duì)孕哺乳期母鼠染鉛,仔鼠的生長(zhǎng)發(fā)育受到影響,且鉛可以在仔鼠的腦部蓄積,并改變不同發(fā)育時(shí)期仔鼠海馬部位的ASIC1amRNA和蛋白表達(dá)水平。結(jié)合前期行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,ASIC1a表達(dá)改變可能是鉛產(chǎn)生神經(jīng)毒性的機(jī)制之一。 2.細(xì)胞實(shí)

9、驗(yàn)顯示,鉛對(duì)大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞具有毒性作用,使細(xì)胞增殖活力下降,細(xì)胞膜受損;同時(shí)鉛干擾C6細(xì)胞中ASIC1a的mRNA和蛋白表達(dá)水平,證實(shí)了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)論。 3.鉛對(duì)CNS ASICs表達(dá)的影響具有-1a亞基特異性。 4.PKC/CaM-ASICs途徑可能構(gòu)成了一條新的鉛神經(jīng)毒作用通路。 綜上所述,本研究經(jīng)體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)相互佐證,從mRNA和蛋白水平上探討了鉛對(duì)ASICs的影響,證實(shí)鉛對(duì)ASIC1a表達(dá)的選擇性干擾

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