天然產(chǎn)物活性成分快速分離分析研究.pdf

1、天然產(chǎn)物有效成分是其發(fā)揮藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)評(píng)價(jià)中藥材的質(zhì)量、制定中藥質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)、優(yōu)化制劑工藝、揭示中藥作用機(jī)制、實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化具有重要意義。
　　天然產(chǎn)物成分復(fù)雜，傳統(tǒng)的成分分離-活性篩選模式雖已闡明多種天然產(chǎn)物活性成分，但是這樣的分離分析周期長(zhǎng)，而且經(jīng)常會(huì)隨著逐步分離純化有效部位的活性越來越弱，最后可能得不到有活性的單體成分，特別是結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定的微量活性成分。因此建立快速分離分析復(fù)雜體系中活性化合物的方法勢(shì)在必行。在本論文中

2、，建立了一系列以高效液相色譜和高速逆流色譜為核心的方法，實(shí)現(xiàn)了天然產(chǎn)物復(fù)雜體系中活性成分的快速篩選、分析以及快速靶向分離制備研究。
　　研究?jī)?nèi)容主要包括以下幾個(gè)部分:
　　(1)將HPLC-DPPH-MS/MS聯(lián)用技術(shù)用于快速篩選和識(shí)別蒙古蒲公英中抗氧化活性成分。從蒙古蒲公英的醇提物中分析和鑒定了32個(gè)具有清除自由基活性的化合物:16個(gè)黃酮類衍生物，10個(gè)苯丙素類衍生物以及6個(gè)羥基苯甲酸類化合物，其中化合物9(isoetin

3、-7-O-β-D-gluco-pyranosyl-2'-O-α-L-arabinopyranoside)、10(isoetin-7-O-β-D-glucopyranosyl-2'-O-α-D-glucopyranoside)和30(mongolicumin A)為新化合物，并首次使用逆流色譜導(dǎo)向分離制備三個(gè)新化合物。
　　(2)建立DPPH/HPLC篩選技術(shù)，從中華卷柏乙酸乙酯部位中篩選出8個(gè)抗氧化活性成分。采用正己烷-乙酸乙酯-

4、甲醇-水(8∶8∶9∶7，v/v/v/v)體系首次對(duì)8個(gè)目標(biāo)化合物進(jìn)行HSCCC同時(shí)制備分離，其中芹菜素和4'-O-甲基-羅伯茨雙黃酮為首次從中華卷柏中分離得到。
　　(3)同時(shí)建立DPPH/HPLC離線篩選技術(shù)，HPLC-DPPH在線篩選技術(shù)和HPLC/DPPH離線篩選技術(shù)，比較三種活性篩法方法在快速識(shí)別葛花提取液中抗氧化活性成分的差異，三種方法均無需對(duì)復(fù)雜體系進(jìn)行預(yù)處理，但是DPPH/HPLC技術(shù)比其他兩種方法具備較高的靈敏度

5、和分辨率且對(duì)HPLC中色譜峰的分辨率要求不高。根據(jù)活性篩選結(jié)果，使用梯度洗脫、固定相推出、循環(huán)洗脫等多種模式的HSCCC技術(shù)導(dǎo)向制備18個(gè)不同極性不同含量的目標(biāo)異黃酮類活性化合物，其中10個(gè)化合物（1個(gè)新化合物）為首次從葛花中分離得到。
　　(4)采用離心超濾/HPLC方法快速篩選出杜仲中與BSA有相互作用的6個(gè)活性成分，并使用HSCCC技術(shù)導(dǎo)向分離制備6個(gè)目標(biāo)活性化合物。通過熒光分光光度法測(cè)定了6個(gè)目標(biāo)化合物以及混合物體系與BS