體內(nèi)評(píng)價(jià)Period2對(duì)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響.pdf

1、目的:研究生物鐘基因Period2(Per2)在U343人膠質(zhì)瘤細(xì)胞過(guò)表達(dá)時(shí),Per2基因?qū)θ四z質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用及對(duì)增殖能力的影響。
　　方法:體外培養(yǎng)U343人膠質(zhì)瘤細(xì)胞,分成三組:分別為Per2基因過(guò)表達(dá)組,空載體組和U343空白對(duì)照組分別培養(yǎng);克隆Per2基因全長(zhǎng),構(gòu)建pcDNA3.1(+)per2真核表達(dá)質(zhì)粒,測(cè)序驗(yàn)證(已完成);用LipofectamineTM2000脂質(zhì)體,分別將pcDNA3.1(+)per2和p

2、cDNA3.1(+)分別轉(zhuǎn)入U(xiǎn)343細(xì)胞內(nèi)構(gòu)建Per2基因過(guò)表達(dá)的U343-pcDNA3.1(+)per2細(xì)胞和空載體U343-pcDNA3.1(+)細(xì)胞。
　　購(gòu)買(mǎi)SPF級(jí)(specific pathogen free)BALB/CNude遺傳背景裸鼠45只,雄性,4-5周齡,按統(tǒng)計(jì)學(xué)原則隨機(jī)分為三組,每組15只,分別將①Per2基因過(guò)表達(dá)U343-pcDNA3.1(+)per2細(xì)胞②空載體U343-pcDNA3.1(+)細(xì)胞③

3、U343細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期,常規(guī)消化細(xì)胞,取1×107個(gè)細(xì)胞(0.2ml),常規(guī)消毒皮膚后,用1ml注射器接種于裸鼠背部皮下,建立皮下移植瘤動(dòng)物模型。
　　實(shí)驗(yàn)組裸鼠共飼養(yǎng)21天,觀察移植瘤后各組裸鼠腫瘤生長(zhǎng)情況和成瘤時(shí)間,至直徑約為0.2cm×0.2cm時(shí)視為成瘤,并記錄成瘤天數(shù);三組裸鼠每組每7天處死5只,取腫瘤組織并比較大小。
　　對(duì)取出的腫瘤組織脫水后石蠟包埋,HE染色法觀察各組腫瘤情況,PCNA免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Pe

4、r2基因過(guò)表達(dá)組、空載體組和空白對(duì)照組腫瘤組織的增殖情況,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:成功將真核質(zhì)粒pcDNA3.1(+)per2和pcDNA3.1(+)轉(zhuǎn)入U(xiǎn)343人膠質(zhì)瘤細(xì)胞,構(gòu)建瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的Per2基因過(guò)表達(dá)U343-pcDNA3.1(+)per2細(xì)胞和空載體U343-pcDNA3.1(+)細(xì)胞。成功建立Per2基因過(guò)表達(dá)組,空載體組和U343空白對(duì)照組的移植瘤裸鼠模型。
　　Per2基因過(guò)表達(dá)組成瘤時(shí)間為4.7±0.2

5、7天;空載體組成瘤時(shí)間為3.2±0.27天;U343空白對(duì)照組成瘤時(shí)間為3.5±0.35天,各組成瘤率均為100％。接種腫瘤細(xì)胞后7-14天,腫瘤生長(zhǎng)明顯活躍、腫瘤體積迅速增大,Per2基因過(guò)表達(dá)組腫瘤組織較空質(zhì)粒組和U343空白對(duì)照組體積小,且兩兩比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。HE染色法顯示為腫瘤組織,PCNA免疫組化結(jié)果顯示:Per2基因過(guò)表達(dá)組腫瘤組織內(nèi)陽(yáng)性表達(dá)減少,經(jīng)兩兩統(tǒng)計(jì)學(xué)比較結(jié)果顯示,Per2基因過(guò)表達(dá)組與空載體組、U