全真一氣湯復方多糖對免疫抑制小鼠免疫功能影響初探.pdf

1、目的:
　　1、研究探討全真一氣湯多糖的提取純化工藝；
　　2、利用環(huán)磷酰胺（CY）復制免疫抑制小鼠實驗模型，從而為研究全真一氣湯多糖的免疫調節(jié)作用及其機理創(chuàng)造條件；
　　3、通過觀察免疫抑制小鼠整體免疫功能變化及腸道黏膜免疫，探討全真一氣湯復方多糖提高免疫抑制小鼠機體免疫功能的可能機制，進一步闡明全真一氣湯復方多糖提高免疫功能的作用靶點，為該方的臨床合理應用提供實驗基礎，為中藥復方多糖治療虛損性疾病提供思路及方法。<

2、br>　　方法:
　　1、以多糖含量為指標，考察脫蛋白、除色素對純化工藝的影響，并比較超濾法和透析法的優(yōu)劣；
　　2、健康SPF級BALB/C雄性小鼠20只，隨機分為2組①模型組（n=10）：腹腔注射環(huán)磷酰胺（CY），劑量為100mg/kg，復制腸道免疫抑制模型；②正常對照組（n=10）：同樣方法注射等量生理鹽水。注射后觀察對比2組小鼠的飲食、活動、體貌等變化，24H后摘眼球取血處死動物，兩組分別摘取小鼠的胸腺和脾臟，稱重（

3、mg），分別除以小鼠體重(g)，得到胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。B.小心取出全小腸,肉眼計數(shù)小腸Peyer’s結的數(shù)量,觀察其形態(tài),從數(shù)目和形態(tài)兩方面對Peyer’s結進行計分。C.全自動血球分析儀檢測小鼠外周血白細胞及淋巴細胞數(shù)目。根據(jù)上述數(shù)據(jù)對建立的腸道免疫抑制模型進行評價；
　　3、實驗造模成功后，另取健康SPF級BALB/C雄性小鼠28只，隨機分為4組：①正常對照組(Z)②模型組(M)③QZYQPS灌胃組(GW)④QZYQPS腹腔

4、注射組(ZS)。GW組每天灌胃給予QZYQPS混懸液，劑量為0.75g.kg-1.d-1；ZS組每天腹腔注射QZYQPS（0.25g.kg-1.d-1)。Z、M、ZS組每天灌胃給予灌胃組同體積生理鹽水，Z、M、GW組每天注射給予注射組同體積的生理鹽水，共10天；
　　4、動物實驗分為三部分，第一部分：探討全真一氣湯多糖對免疫抑制小鼠腸道整體免疫功能的影響（包括檢測小鼠臟器指數(shù)、派氏結計分、外周血白細胞及淋巴細胞計數(shù)、血清IL-2濃

5、度、溶血素含量、耳腫脹率）；第二部分：采用免疫組化的方法檢測胸腺、脾臟、小腸絨毛凋亡基因Bcl-2、Bax的含量；第三部分：采用ELASA法測定腸道SIgA的含量。
　　結果:
　　1、經(jīng)過透析法精制后多糖含量高于超濾法；經(jīng)脫蛋白工藝處理后，多糖含量略有下降，但脫蛋白后再經(jīng)過透析法精制，多糖含量有大幅度提升；除色素工藝對多糖含量的影響較小，但除色素后再經(jīng)過透析法精制，可以得到高純度的多糖，含量達87.63±0.97％；

6、>　　2、腹腔注射CY及生理鹽水后小鼠無一例死亡，正常組小鼠一般情況良好，毛色光亮，對外界刺激反應靈敏；模型組小鼠精神萎靡，毛色枯槁，活動和進食較正常組減少。經(jīng)CY腹腔注射24小時后的小鼠臟器指數(shù)降低，Peyer’s結計分較正常組比較減少，外周血白細胞數(shù)目及淋巴細胞數(shù)目均明顯降低。對比正常組有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；
　　3、GW組、ZS組的臟器指數(shù)、派氏結計分、外周血白細胞數(shù)目及淋巴細胞數(shù)目均較M組高（P＜0.05）；GW組

7、、ZS組的血清溶血素含量及IL-2濃度較M組高（P＜0.05）；GW組、ZS組的耳腫脹率較模型組高（P＜0.05），且GW組有優(yōu)于ZS組的優(yōu)勢；
　　4、GW組、ZS組胸腺、脾臟、小腸絨毛與M組比較抑制凋亡基因Bcl-2含量升高、促凋亡基因Bax的含量減低（P＜0.05）；GW組、ZS組的腸道SIgA的含量較模型組增加（P＜0.05）；且GW組均優(yōu)于ZS組。
　　結論：
　　1、脫蛋白、除色素工藝對于全真一氣湯復方多糖

8、精制過程有較大的影響，優(yōu)化后的最終工藝為：水提→醇沉→酶法脫蛋白→大孔樹脂除色素→透析；
　　2、腹腔注射劑量為100mg/kg環(huán)磷酰胺（CY）24小時可以成功構建小鼠免疫抑制模型；
　　3、全真一氣湯復方多糖可對抗免疫抑制小鼠免疫器官重量、外周血白細胞及淋巴細胞數(shù)目的降低，刺激外周血血清IL-2的增加，對體液和細胞免疫功能具有促進作用，同時也提示多糖口服給藥免疫活性強于腹腔注射給藥；
　　4、QZYQPS口服及注射有