吖啶酯類底物的合成及其在對氧磷酶活性測定中的應(yīng)用.pdf

1、腫瘤是危及人們生命的“殺手”之一，因此及早的發(fā)現(xiàn)和治療是非常重要的，但由于腫瘤早期的癥狀不是很明顯，容易出現(xiàn)誤診和漏診等問題。通常在腫瘤發(fā)生的4.8周前，血清或體液中的對氧磷酶的活性會顯著增加或減少，因此，測定體液中的對氧磷酶(PON)的活性是診斷腫瘤的重要手段之一。
　　 測定對氧磷酶活性的方法有多種，但由于干擾因素和靈敏度的問題，能用于體液樣品的測定方法卻很少。目前文獻(xiàn)多以紫外吸收光譜法測定酶的活性，該方法簡單，但背景噪音大

2、，并且生物體是一個極其復(fù)雜的體系，酶提取液中含有的其它吸光成分較多，紫外-可見分光光度法測定專一性不強(qiáng)，靈敏度也不高。而化學(xué)發(fā)光法不需要光源，背景噪音小，干擾少，測量時靈敏度高，用于測定酶的活性不需要對具有紫外吸收的干擾物進(jìn)行分離。在本論文中，合成了三個吖啶酯類底物，以9-(4-對氯苯氧羰基)-10-甲基吖啶三氟甲基磺酸鹽(CPOCMA)為研究對象，采用化學(xué)發(fā)光法來測定血清中對氧磷酶的活性。
　　 底物CPOCMA是由發(fā)光基團(tuán)和

3、離去基團(tuán)組成的。通過對其發(fā)光性能的研究發(fā)現(xiàn)，CPOCMA的化學(xué)發(fā)光屬于瞬間發(fā)光，整個發(fā)光過程在20s內(nèi)即可完成；引發(fā)劑可以影響CPOCMA的發(fā)光強(qiáng)度，當(dāng)在0.1％H2O2與0.025 mol/L HNO3和1.0mol/L NaOH與1.0×10-3mol/L CTAB的情況下，吖啶酯類底物的發(fā)光強(qiáng)度最大；吖啶酯類底物儲存在2℃和25℃時，隨著溶液的pH(6，7，8)的增大，試劑的穩(wěn)定性變差。
　　 通過對CPOCMA的發(fā)光性能

4、的研究，將其作為化學(xué)發(fā)光法測定血清中PON的活性的發(fā)光底物，對底物的特異性、方法的可靠性進(jìn)行了研究。研究發(fā)現(xiàn)：化學(xué)發(fā)光的底物CPOCMA具有高效的化學(xué)發(fā)光效率，其濃度比紫外法測定PON活性的底物乙酰苯酯和二嗪農(nóng)的濃度至少低1.0×10-5倍，且CPOCMA的用量少，成本低。此外，化學(xué)發(fā)光法測定PON的活性在生理的pH下就可完成。血清中的PON和人對氧磷酶催化CPOCMA水解的米氏常數(shù)(Km)分別為85 nmol/L和83 nmol/L，

5、且二者很接近，這可能是受血清中其他酯酶的影響所致，例如脂肪酶和乙酰膽堿酯酶。激動劑氯化鈉和氯化鈣都可以提高rHuPON和血清中PON的活性，但是對血清中的乙酰膽堿酯酶和脂肪酶的活性沒有影響，且在加入PON的激動劑氯化鈣時，PON的活性是乙酰膽堿酯酶和脂肪酶的7.8倍。因此，PON的激動劑的加入提高了底物的特異性和靈敏度。
　　 我們分別以CPOCMA和二嗪農(nóng)、乙酰苯酯為底物，對30個血清樣品進(jìn)行研究，通過化學(xué)發(fā)光法和紫外分光光度