頸動脈粥樣硬化穩(wěn)定斑塊與不穩(wěn)定斑塊比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的:動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是一種多種危險因素所致的進行性動脈血管疾病，病理表現(xiàn)復(fù)雜多樣，從簡單的內(nèi)膜增厚到血管狹窄甚至引起致命性的冠狀動脈閉塞、心肌梗死或腦梗死。頸動脈粥樣硬化是缺血性腦血管病的危險因素之一，頸動脈斑塊所致管腔狹窄、血流動力學(xué)改變及斑塊脫落形成栓子是引起腦缺血的主要機制。比較蛋白質(zhì)組學(xué)主要是應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)和鑒定在不同條件下蛋白質(zhì)組中的差異成分，從而為揭示一定的生物學(xué)現(xiàn)象和規(guī)律提供依

2、據(jù)。通過比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究，我們可以對疾病的發(fā)生和發(fā)展過程中的蛋白質(zhì)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)有一個完整而清晰的認(rèn)識，為進一步理解疾病發(fā)生發(fā)展的機制提供有力的證據(jù)。既往研究證明，動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性主要與炎癥反應(yīng)和金屬蛋白酶分泌有關(guān)。但其具體病理生理機制尚不很清楚。所以，了解穩(wěn)定斑塊與不穩(wěn)定斑塊在整體蛋白表達水平上的差異是十分必要的，其結(jié)果有助于我們了解動脈粥樣硬化形成的病理生理機制以及不穩(wěn)定斑塊發(fā)生發(fā)展的分子機制，同時為我們篩選動脈粥樣硬化的血清標(biāo)

3、志物和尋找新的藥物靶標(biāo)提供可靠依據(jù)。本研究應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對人體頸內(nèi)動脈粥樣硬化斑塊進行研究，分離、鑒定差異蛋白，以期深入理解不穩(wěn)定斑塊形成的病理機制，為動脈粥樣硬化的治療提供新的方向。
　　方法:1、實驗標(biāo)本和臨床資料搜集:搜集2010年3月到2012年11月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院血管外科行血管內(nèi)膜剝脫術(shù)的患者術(shù)后所得頸內(nèi)動脈粥樣硬化斑塊。搜集患者臨床資料，包括性別、年齡、既往病史、頸部血管超聲結(jié)果（內(nèi)膜厚度、斑塊回聲強度、血

4、管狹窄率等）等。入選的病例需滿足以下標(biāo)準(zhǔn):性別相同、年齡60-70歲，無基礎(chǔ)疾病，頸內(nèi)動脈狹窄率超過70％，近6個月有腦缺血表現(xiàn)。2、依據(jù)美國心臟協(xié)會(AHA)制定的標(biāo)準(zhǔn)將獲取的斑塊分為穩(wěn)定斑塊組和不穩(wěn)定斑塊組。3、提取蛋白質(zhì)，F(xiàn)ASP酶解、提取肽段、肽段脫鹽，非標(biāo)記(Lable-Free)定量結(jié)合LC/MS質(zhì)譜技術(shù)鑒定蛋白質(zhì)肽段結(jié)合數(shù)據(jù)庫進行生物功能分析。4Westernbolt技術(shù)對鑒定到的其中一個蛋白DJ-1的表達變化進行驗證。<

5、br>　　結(jié)果:
　　1、分組結(jié)果:根據(jù)頸動脈血管超聲將所得動脈粥樣硬化斑塊分為2組，穩(wěn)定斑塊組3例，不穩(wěn)定斑塊組3例。
　　2、運用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)鑒定出差異表達蛋白63個，在穩(wěn)定斑塊中，表達下調(diào)的蛋白有25個，包括原骨膠原蛋白、C1qA亞基、膠質(zhì)源性微管連接蛋白、膠原α-1(Ⅰ、Ⅵ、(ⅩⅩⅠ))鏈、膠原α-2(Ⅰ、Ⅵ)鏈、膠原α-3(Ⅰ、Ⅵ)鏈、α2抗纖溶蛋白酶原、Z依賴性蛋白酶抑制劑、生長停滯特異性蛋白6、巰基氧化酶1、

6、凝血因子10、人源性激肽釋放酶結(jié)合蛋白、核糖核酸酶4、金屬蛋白酶抑制劑3、胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白復(fù)合體、血紅蛋白亞基γ-2、羧肽酶B2、N-乙酰胞壁酸-L丙氨酸酰胺酶、PTB域吞沒適配器蛋白1、溶菌酶C、巨噬細胞金屬彈性蛋白酶。表達上調(diào)的蛋白有38個，包括多肽激活劑前體、40S核糖體蛋白SA、鈣聯(lián)結(jié)蛋白、α-parvin、水通道蛋白1、蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶、CD44、晶體蛋白B鏈、氯通道蛋白1、視黃醛脫氫酶1、NADH-細胞色素還原酶b

7、5、凝血因子13α鏈、肌球蛋白輕鏈、半乳糖凝素、核糖核酸酶抑制劑、乙醇脫氫酶、S100A4、氨基肽酶、冠蛋白、RabGDP分解抑制劑、14-3-3蛋白（β/α、γ、ε、η）、轉(zhuǎn)醛醇酶、巨噬細胞帽蛋白、RhoGDP分解抑制劑2、S100A10、肌動蛋白相關(guān)蛋白2、原肌球蛋白α-4鏈、網(wǎng)格蛋白重鏈、糖苷酶、葡萄糖磷酸變位酶、網(wǎng)蛋白、lipoma-preferredpartener、胞質(zhì)非特異性二肽酶、DJ-1蛋白、PDZ-LIM域結(jié)合蛋白7

8、。GeneCodis3分析差異蛋白的生物功能，結(jié)果顯示差異表達蛋白涉及細胞凋亡、細胞粘附、蛋白酶解、老化、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、血液凝固、糖代謝等方面。
　　3、經(jīng)Westernblot驗證，在穩(wěn)定斑塊中，DJ-1蛋白的表達水平高于其在不穩(wěn)定斑塊中的表達水平。
　　結(jié)論:
　　1、運用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)鑒定頸動脈粥樣硬化穩(wěn)定斑塊和不穩(wěn)定斑塊的差異表達蛋白涉及細胞凋亡、細胞粘附、蛋白酶解、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、老化、血液凝固、糖代謝等方面，我們認(rèn)為