CD98在實驗性IBD小鼠外周血和結(jié)腸上皮中的表達.pdf

1、背景和目的：
　　炎癥性腸病(inflammatoryboweldisease，IBD)包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerativecolitis，UC)和克羅恩病(Crohn'sdisease，CD)，其病因及發(fā)病機制目前仍不清楚。該病在西方國家較為常見，但近年來我國IBD的發(fā)病率亦逐年升高。目前認為，環(huán)境、遺傳、感染及免疫因素共同參與IBD的發(fā)病，其中免疫因素在IBD發(fā)病中起著關(guān)鍵作用。β1整合素(β1integrin)是整合素的一

2、個亞群，主要介導(dǎo)細胞-細胞外基質(zhì)成分間的粘附。近年來發(fā)現(xiàn)CD98可以通過多種機制調(diào)節(jié)β1整合素的表達和聚集，進而影響細胞粘附、極化等，促進炎癥的進程，并使炎癥持續(xù)化，還有氨基酸轉(zhuǎn)運功能，促進細胞融合和增殖等。目前，國內(nèi)有關(guān)CD98與IBD的相關(guān)研究較少。
　　本實驗通過建立IBD動物模型，觀察小鼠疾病活動情況及結(jié)腸組織學(xué)變化，檢測CD98在外周血和結(jié)腸組織中的表達水平，并對模型組進行干預(yù)，研究CD98在IBD致病中的作用。

3、　　方法：
　　將SPF級的雄性BALb/c小鼠隨機分為4組，每組為12只。具體分組如下。正常對照組:小鼠不進行任何的干預(yù)，自由飲食。生理鹽水組:灌腸前禁食24h，自由飲水，灌腸后自由飲食，于實驗第1天、第8天及第15天分別用100μl的生理鹽水灌腸。50％乙醇組:將生理鹽水組的生理鹽水替換為50％乙醇溶液100μl灌腸，其他操作和生理鹽水組相同。TNBS+50％乙醇組:灌腸前禁食24h，自由飲水，灌腸后自由飲食，于第1天用2.0

4、mgTNBS/50％乙醇溶液100μl灌腸，第8天用2.5mgTNBS/50％乙醇溶液100μl灌腸，第15天用3.0mgTNBS/50％乙醇溶液100μl灌腸。分別對各組的小鼠進行DAI評分，于實驗的第21天將小鼠全部處死。用流式細胞術(shù)檢測外周血中CD98的表達，結(jié)腸組織切片后做HE染色并進行HI評分，免疫組織化學(xué)方法檢測小鼠結(jié)腸組織內(nèi)CD98的表達。數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件處理，所有的計量資料均采用均數(shù)±標準差（(x)±s）

5、表示，樣本均數(shù)間的比較采用單因素方差分析;四格表資料的比較采用x2檢驗。以α=0.05為顯著性檢驗標準。
　　結(jié)果：
　　1.實驗發(fā)現(xiàn)正常對照組和生理鹽水組的小鼠，其結(jié)腸粘膜沒有發(fā)現(xiàn)炎癥細胞侵潤，粘膜上皮完整，腺體的排列規(guī)則。而50％乙醇組小鼠的結(jié)腸粘膜層可發(fā)現(xiàn)少量淋巴細胞分布，粘膜上皮也基本完整，粘膜腺體的排列基本規(guī)則。TNBS+50％乙醇組小鼠的粘膜層和肌層內(nèi)可見大量的炎癥細胞侵潤，并且粘膜下層和固有肌層內(nèi)可以發(fā)現(xiàn)小血管

6、增生，粘膜上皮細胞破碎，粘膜上皮可以見到小片狀的壞死，并且結(jié)腸粘膜組織學(xué)損傷的程度越深，CD98在外周血和結(jié)腸粘膜組織中的表達就越高。
　　2.流式細胞術(shù):應(yīng)用流式細胞儀及Cellquest3.0軟件獲取和分析雙色熒光參數(shù)，進而得到全部數(shù)據(jù)。實驗得到正常對照組、生理鹽水組、50％乙醇組和TNBS+50％乙醇組的外周血的CD98表達陽性率分別為(71.10±0.81)％、(72.27±1.81)％、(73.72±2.26)％和(81

7、.32±2.87)％，各對照組CD98陽性率與TNBS+50％乙醇組比較具有顯著差異(F=29.460，P＜0.05)。TNBS+50％乙醇組的外周血的CD98的陽性率高于其他各組。
　　3.免疫組織化學(xué):CD98定位于細胞表面，用顯微鏡觀察，記錄每個視野結(jié)腸上皮細胞的陽性細胞數(shù)所占比例以及著色的強度并以此來綜合判斷。陽性細胞數(shù)比例計分法為:≤25％、26％～50％、51％～75％、＞75％分別計為0分、1分、2分、3分;著色強度

8、計分法為:輕度著色、中度著色、重度著色分別計為1分、2分、3分。二者計分相加，規(guī)定≥3分代表CD98表達增強（顯示陽性），規(guī)定＜3分代表CD98表達較低或缺失（顯示陰性）。實驗得到正常對照組、生理鹽水組、50％乙醇組和TNBS+50％乙醇組結(jié)腸上皮中CD98表達的陽性率分別為25.0％(3/12)、25.0％(3/12)、33.3％(4/12)、75.0％(9/12)，各組的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=4.567，P＜0.05)。TNBS