1,25二羥維生素D3對去勢小鼠調(diào)節(jié)性T細胞的影響.pdf

1、目的：⑴通過觀察去勢骨質(zhì)疏松模型小鼠體內(nèi)Treg細胞數(shù)量及功能變化，探討Treg與絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的關(guān)系。⑵通過給予去勢小鼠羅蓋全(1，25(OH)2D3)，檢測模型小鼠體內(nèi)Treg細胞數(shù)量及功能變化，探討1，25(OH)2D3抗骨質(zhì)疏松癥作用是否與其調(diào)節(jié)Treg有關(guān)。
　　 方法：50只8周齡雌性BALB/c小鼠隨機分為5組，每組10只。第1組基礎(chǔ)組(BAS)不用藥，在實驗開始即處死;第2組假手術(shù)組(SHAM)術(shù)中沒有進行卵巢

2、切除，術(shù)后每日給予生理鹽水10ml/kg灌胃:第3～5組進行雙側(cè)卵巢切除，第3組去卵巢模型對照組(OVX)術(shù)后每日灌胃給予生理鹽水10ml/kg;第4組藥物干預組(OVX+1，25(OH)2D3)術(shù)后每日灌胃給予羅蓋全0.1ug/(kg.day);第5組陽性藥物已烯雌酚對照組(OVX+DES)術(shù)后每日灌胃給予陽性藥物己烯雌酚0.1mg/(kg.day)。動物于給藥90天后處死，取脾臟、脛骨、股骨進行后續(xù)實驗。小鼠脾臟分兩部分，一部分應(yīng)用

3、流式細胞術(shù)檢測Treg細胞數(shù)量變化，另一部分應(yīng)用實時熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測Foxp3基因表達情況。股骨經(jīng)EDTA脫鈣石蠟包埋應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測Foxp3蛋白表達情況。取脛骨進行骨形態(tài)計量學分析。最后，采用SPSS16.0軟件對各組小鼠體內(nèi)Treg細胞數(shù)量變化及Foxp3基因蛋白表達與骨形態(tài)計量學參數(shù)進行相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果：①小鼠脛骨骨形態(tài)計量學測量:與SHAM組相比，OVX組骨小梁面積百分數(shù)(％Tb.Ar)，骨小梁

4、厚度(Tb.Th)，骨小梁數(shù)目(Tb.N)顯著下降(P＜0.01)，骨小梁分離度(Tb.Sp)，每毫米破骨細胞數(shù)目(Oc.N)均顯著增加(P＜0.01)。與OVX組相比，DES組％Tb.Ar、Tb.Th、Tb.N顯著增加(P＜0.01)，Tb.Sp、Oc.N顯著減少(P＜0.01)。與OV×組相比，1，25(OH)2D3組％Tb.Ar、Tb.Th、Tb.N顯著增加(P＜0.01)，Tb.Sp、 Oc.N顯著減少(P＜0.01)。與SHA

5、M組相比，OVX組骨小粱面積、厚度和數(shù)量都明顯減少，骨小粱間隙增寬，提示OVX組在去卵巢90d后發(fā)生了明顯的骨質(zhì)疏松。與OVX組相比，DES組和1，25(OH)2D3組骨小粱面積、數(shù)量有明顯增加，間隙變窄，提示DES及1，25(OH)2D3均可有效預防去卵巢后骨丟失。②小鼠脾臟Treg細胞數(shù)量變化:與SHAM組比較，OVX組小鼠體內(nèi)Treg數(shù)量明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，DES組，1，25(OH)2D3組略低于SHAM組

6、，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);與OVX組比較，SHAM組、DES組、1，25(OH)2D3組小鼠體內(nèi)Treg數(shù)量明顯高于OVX組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。③小鼠脾臟Foxp3基因表達:與SHAM組比較，OVX組、DES組、1，25(OH)2D3組小鼠體內(nèi)Foxp3基因表達明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);與OVX組比較，1，25(OH)2D3組和DES組Foxp3基因高表達，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)