牙齦卟啉單胞菌牙齦素促凝血功能域HGP44的基因克隆重組和表達(dá).pdf

1、革蘭氏陰性厭氧菌牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonas gingivalis，P.g）是公認(rèn)的主要的牙周可疑致病菌。牙齦素是牙齦卟啉單胞菌分泌的胞外蛋白酶，是其重要的毒力因子。與牙周病密切相關(guān)的牙齦素包括兩種，精氨酸特異性蛋白酶（Arginine-gingipains，Rgps）和賴氨酸特異性蛋白酶（Lysine-gingipain，Kgp）。其中Rgps又稱卟啉素，分為RgpA和RgpB兩種。RgpA和Kgp均為非共價復(fù)合物，包一

2、個N-末端前肽區(qū)，蛋白水解區(qū)和一個C-末端粘附素區(qū)（HGP15[HbR]，HGP17，HGP27和HGP44），具有獨(dú)立的催化區(qū)域和凝集區(qū)域。HGP44是兩種牙齦素上共有的一段粘附素區(qū)域，HGP44能夠通過粘附到HIV-1 gp120蛋白上，阻斷HIV-1外膜介導(dǎo)的膜融合，進(jìn)一步阻斷HIV感染。同時，P.g誘導(dǎo)的血小板聚集依賴細(xì)胞內(nèi)編碼HGP44粘附素的基因Hgp44。
　　 本研究的目的是克隆表達(dá)P.g蛋白酶的粘附素編碼基因H

3、gp44，用于Hgp44的單克隆及多克隆抗體的制備，為進(jìn)一步研究Hgp44的致病性及P.g促進(jìn)血小板聚集的具體機(jī)制，以及明確牙周病與冠心病之間的關(guān)系墊定基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 本文通過PCR方法擴(kuò)增得到P.g ATCC33277的Hgp44基因，T-A克隆連接到pMD18-T載體，酶切連接到pET22b表達(dá)載體上，轉(zhuǎn)化到BL21（DE3）中，構(gòu)建Hgp44-pET22b-BL21（DE3）重組菌。IPTG誘導(dǎo)重組菌表