吸入糖皮質激素對哮喘大鼠肺組織YKL-40表達的影響.pdf

1、目的
　　通過對亞急性的哮喘大鼠模型進行的實驗研究，了解吸入性糖皮質激素藥物使用后，大鼠的氣道炎癥及氣道阻力發(fā)生的變化，以及大鼠肺組織的甲殼質酶3樣蛋白質1(Chitinase-3-like-1 protein，YKL-40)、白細胞介素-8（Interleukin-8， IL-8）表達變化，了解吸入性糖皮質激素對哮喘大鼠肺組織中YKL-40 mRNA及蛋白、IL-8mRNA表達水平的影響。
　　方法
　　1.40只清

2、潔健康，約1月齡，體重150-170克的雄性SD大鼠，隨機分配為以下四個組別：正常對照組（Control組）、哮喘模型組（Model組）、地塞米松組（DXM組），布地奈德組（BUD組），每一組分別劃分10只SD大鼠。
　　2. Model組大鼠、DXM組大鼠、BUD組大鼠在實驗進展的第1天、第8天給予腹腔注射10﹪的卵清蛋白(OVA)溶液1毫升，稀釋有免疫佐劑氫氧化鋁0.1克。在實驗第15天，用2﹪的卵清蛋白溶液4毫升對大鼠進行霧

3、化吸入以激發(fā)哮喘，每1次激發(fā)的時間為10分鐘，1次/天，連續(xù)共兩周。其中DXM組大鼠在先給予腹腔注射地塞米松注射液（劑量按0.5毫克/千克計算）后半小時再予以霧化吸入激發(fā)OVA，而布地奈德組先給予布地奈德來泵霧化吸入(按1mg/2ml使用)。相對應正常對照組則采用生理鹽水代替卵清蛋白溶液進行腹腔注射與霧化吸入以致敏與激發(fā)哮喘產生。
　　3.在實驗第28天，四組大鼠先予以檢測氣道阻力值，在檢測結束后,采用剪斷大鼠腹主動脈的方法來處死

4、動物，在獲取左右兩側肺組織后，取左肺組織用實時熒光定量PCR方法（qPCR）來檢測肺組織中YKL-40與IL-8 mRNA的轉錄水平，并通過Western Blot檢測方法來檢測大鼠肺組織中YKL-40的蛋白表達水平；取大鼠右側肺組織通過HE染色病理檢查來分析四組大鼠中氣道炎癥的變化情況。
　　結果
　　1.成功建立亞急性哮喘大鼠模型：實驗第14天開始予以2﹪卵清蛋白溶液霧化吸入后，隨著次數增加逐漸出現以下哮喘發(fā)作癥狀：面部

5、搔抓、呼吸頻率加快、點頭呼吸、面部紫紺，大小便失禁等，于實驗第28天予檢測其氣道阻力變化，氣道阻力結果提示哮喘模型組的氣道阻力均有顯著增加，與正常對照組比較有顯著的差異（P＜0.05）；通過大鼠肺組織的HE染色病理切片進行觀察：Model組肺組織中支氣管與肺泡周圍嗜酸性粒細胞增多，氣道內有較多粘性分泌物，支氣管管壁稍顯增厚。
　　2.BUD組大鼠肺組織氣道炎癥的變化:與哮喘大鼠Model組比較， BUD組炎癥細胞及粘性分泌物均明顯

6、減少。DXM組同BUD組對比，形態(tài)學差異不大。control組中未發(fā)現明顯炎癥反應。
　　3.BUD組大鼠氣道阻力變化:經過鹽酸組胺霧化吸入后，哮喘大鼠Model組的氣道阻力與Control組比較顯著增高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。布地奈德組大鼠氣道阻力和哮喘模型大鼠相比較有顯著降低，有顯著的差異(P＜0.05)，與正常對照組相比較氣道阻力有明顯增高，有顯著的差異(P＜0.05)，同地塞米松組相比較，發(fā)現沒有顯著差異。

7、r>　　4. BUD大鼠肺組織中YKL-40與IL-8的mRNA變化：哮喘大鼠Model組的肺組織YKL-40 mRNA與IL-8的mRNA轉錄水平與Control組比較顯著增高(P＜0.05)。BUD組肺組織的YKL-40 mRNA與IL-8的mRNA轉錄水平與Model組比較顯著降低(P＜0.05)，仍顯著高于正常對照組(P＜0.05)，同地塞米松組對比沒有顯著差異。
　　5. BUD組大鼠肺組織YKL-40蛋白表達量變化情況

8、：哮喘模型組大鼠的肺組織YKL-40的蛋白表達量同正常對照組相比有顯著的升高(P＜0.05)，布地奈德組大鼠的肺組織YKL-40的蛋白表達量同哮喘模型組相比較有顯著的降低(P＜0.05)，但仍高于正常對照組，同地塞米松組比較沒有顯著的差異。
　　結論
　　1.以卵清蛋白做為抗原可成功建立哮喘大鼠亞急性模型。哮喘模型組大鼠的肺組織中YKL-40的蛋白表達量同正常對照組相比有顯著的升高，布地奈德組大鼠的肺組織YKL-40的蛋白表