EPA、DHA對(duì)脂多糖刺激大鼠系膜細(xì)胞保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：
　　 通過(guò)制備脂多糖(LPS)致大鼠腎小球系膜細(xì)胞(GMCs)損傷模型,研究二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)對(duì)炎癥狀態(tài)下GMCs表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)及其抑制劑金屬蛋白酶組織抑制因子(TIMPs)、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)的影響,探討EPA、DHA對(duì)損傷的GMCs可能的保護(hù)機(jī)制。
　　 方法與結(jié)果

2、r>　　 1.實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)EPA、DHA對(duì)LPS刺激GMCs MMP-2/TIMP-2 mRNA的表達(dá)
　　 體外培養(yǎng)大鼠GMCs,取第4代細(xì)胞計(jì)數(shù)后按1x105細(xì)胞/孔濃度接種于6孔培養(yǎng)板,實(shí)驗(yàn)分六組:正常對(duì)照組；LPS刺激組(LPS終濃度為10μg·mL-1)；EPA(終濃度10μmol·L-1、100μmol·L-1)組；DHA(終濃度10μmol·L-1、100μmol·L-1)組。培養(yǎng)48h后,實(shí)時(shí)定量PC

3、R方法檢測(cè)MMP-2、TIMP-2 mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果顯示:LPS刺激能夠使GMCs表達(dá)MMP-2 mRNA及MMP-2/TIMP-2比值明顯降低、TIMP-2 mRNA明顯增高(P<0.01)。EPA、DHA顯示出了對(duì)MMP-2、TIMP-2 mRNA表達(dá)的抑制作用及對(duì)MMP-2/TIMP-2比值的促進(jìn)作用。
　　 2.實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)EPA、DHA對(duì)LPS刺激GMCs MMP-9/TIMP-1 mRNA

4、的表達(dá)
　　 取第4代細(xì)胞計(jì)數(shù)后按1x105細(xì)胞/孔濃度接種于6孔培養(yǎng)板,實(shí)驗(yàn)分組同上。培養(yǎng)48h后,實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)MMP-9、TIMP-1 mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果顯示:LPS刺激能夠使GMCs表達(dá)MMP-9 mRNA及MMP-9/TIMP-1比值明顯降低、TIMP-1 mRNA明顯增高(P<0.01)。EPA、DHA顯示出了對(duì)MMP-9、TIMP-1 mRNA表達(dá)的抑制作用及對(duì)MMP-9/TIMP-1比值的

5、促進(jìn)作用。
　　 3.實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)EPA、DHA對(duì)LPS刺激GMCs PPARγmRNA的表達(dá)
　　 細(xì)胞計(jì)數(shù)后按1x105細(xì)胞/孔濃度接種于6孔培養(yǎng)板,實(shí)驗(yàn)分組同上。分別培養(yǎng)24h、48h、72h后,實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)PPARγmRNA表達(dá)。結(jié)果顯示:LPS刺激GMCs后,細(xì)胞表達(dá)PPARγmRNA明顯減少(P<0.01)。EPA、DHA能促進(jìn)GMCs PPARγ mRNA的表達(dá)。
　　 4.實(shí)時(shí)

6、定量PCR方法檢測(cè)EPA、DHA對(duì)LPS刺激GMCs MCP-1、TGF-β1 mRNA的表達(dá)
　　 細(xì)胞計(jì)數(shù)后按1x105細(xì)胞/孔濃度接種于6孔培養(yǎng)板,實(shí)驗(yàn)分組同上。分別培養(yǎng)24h、48h、72h后,實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)MCP-1、TGF-β1 mRNA表達(dá)。結(jié)果顯示:LPS刺激GMCs后,細(xì)胞表達(dá)MCP-1、TGF-β1 mRNA明顯增加(P<0.01)。EPA、DHA能抑制GMCs MCP-1、TGF-β1 mRNA的表

7、達(dá)。
　　 5.免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)EPA、DHA對(duì)LPS刺激GMCs PPARγ、TGF-β1蛋白的表達(dá)
　　 細(xì)胞計(jì)數(shù)后按1x104細(xì)胞/孔濃度接種于24孔培養(yǎng)板,實(shí)驗(yàn)分組同上。培養(yǎng)48h后,免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)PPARγ、TGF-β1蛋白。結(jié)果顯示:LPS刺激GMCs后,細(xì)胞分泌PPARγ蛋白明顯減少、TGF-β1蛋白明顯增加(P<0.05)。正常組細(xì)胞的胞漿區(qū)染色低,LPS組的細(xì)胞則可見明顯的黃染。EPA、DHA

8、顯示出了對(duì)PPARγ蛋白分泌的促進(jìn)作用及對(duì)TGF-β1蛋白分泌的抑制作用。
　　 結(jié)論
　　 1 EPA、DHA能抑制LPS刺激的GMCs表達(dá)MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2mRNA,提高M(jìn)MP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1比值。
　　 2 EPA、DHA能促進(jìn)LPS刺激的GMCs PPARγmRNA及蛋白的表達(dá)。
　　 3 EPA、DHA能抑制LPS刺激的GMCs MCP