利用大腸桿菌和煙草表達(dá)的重組全人源藥用抗EGFR單鏈抗體的抗腫瘤分析.pdf

1、表皮生長(zhǎng)因子受體（Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR）是腫瘤治療中一個(gè)很重要的靶分子，針對(duì)EGFR靶點(diǎn)的抗體藥物的研究具有廣闊的前景。scFv是一種小分子抗體片段，其免疫原性較小，已逐漸成為抗體靶向治療的重要研究方向。目前，雖然動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)抗體時(shí)，抗體活性高，但生產(chǎn)成本高。原核生物反應(yīng)器可以有效的解決生產(chǎn)成本高的缺陷，但是其仍存在不足之處，它不能對(duì)翻譯后的蛋白進(jìn)行修飾，因而只適合表達(dá) Fv，scF

2、v、Fab等抗體。植物生物反應(yīng)器可以解決以上兩者的缺陷，被認(rèn)為是一種生產(chǎn)成本低、蛋白活性高的生物反應(yīng)器。如已經(jīng)有多種Fab、scFv等都已在植物中成功地表達(dá)?？贵w經(jīng)歷了鼠源抗體，人源化抗體和全人源抗體三個(gè)階段，全人源scFv能很大程度的消減HAMA反應(yīng)。乳腺癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤?？笶GFR單克隆抗體具有抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖的作用。
　　本試驗(yàn)采用生物信息方法對(duì)HLL和LLH基因序列進(jìn)行構(gòu)建，并預(yù)測(cè)這兩種蛋白的性質(zhì)。構(gòu)建了pE

3、T-28a-c(+)-HLL、pET-28a-c(+)-LLH表達(dá)載體；利用E.coli生產(chǎn)HLL-pET和LLH-pET蛋白，并分析其抗腫瘤活性。構(gòu)建了pBI121-HLL-YC表達(dá)載體；利用煙草生產(chǎn)HLL-YC蛋白，并對(duì)其進(jìn)行了Western Blotting檢測(cè)。為了提高目的蛋白在煙草中的表達(dá)量和生物活性，構(gòu)建了HLL-YCPH-YC和LLH-YCPH-YC基因序列。研究結(jié)果如下：
　　1.HLL、LLH的生化指標(biāo)都與可溶性

4、scFv相符，但只有HLL與可溶性scFv有相似的空間結(jié)構(gòu)。
　　2.構(gòu)建了pET-28a-c(+)-HLL、pET-28a-c(+)-LLH表達(dá)載體，表達(dá)了HLL-pET和LLH-pET蛋白。HLL-pET對(duì)MCF-7有顯著的增殖抑制作用，具有生物活性。LLH-pET對(duì)MCF-7無(wú)顯著的增殖抑制作用，不具有生物活性。
　　3.構(gòu)建了pBI121-HLL-YC表達(dá)載體，表達(dá)了HLL-YC蛋白。
　　4.構(gòu)建了HLL-Y