Periostin在胃癌侵襲和轉(zhuǎn)移中的機(jī)制及臨床意義的研究.pdf

1、目的：
　　 1.探索periostin基因沉默后對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲的影響；
　　 2.研究胃癌患者的胃癌組織和血清中periostin蛋白的表達(dá)及其與臨床病理因素的相關(guān)性。
　　 方法：
　　 1)通過細(xì)菌轉(zhuǎn)化、酶切、凝膠電泳、基因測(cè)序鑒定和基因重組技術(shù)等方法構(gòu)建針對(duì)periostin的siRNA質(zhì)粒pRNAT-U6.1-periostin和陰性對(duì)照質(zhì)粒pRNAT-U6.1-CON。利用脂質(zhì)體介

2、導(dǎo)轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染人胃癌SGC-7901細(xì)胞，經(jīng)G418篩選得到穩(wěn)定抑制periostin表達(dá)的胃癌細(xì)胞模型(siRNA-periostin細(xì)胞)；
　　 2)采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)siRNA-periostin細(xì)胞中periostin mRNA的表達(dá)。通過MTT比色法檢測(cè)periostin基因沉默對(duì)胃癌細(xì)胞體外增殖能力的影響。PI染色固定的方法檢測(cè)periostin基因沉默對(duì)胃癌細(xì)胞周期分布的改變。Ann

3、exin V和PI雙染并經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞對(duì)化學(xué)藥物氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性。采用Boyden小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)periostin基因沉默對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲性的影響。
　　 3)利用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)74例胃癌組織及35例非腫瘤胃黏膜中periostin蛋白和COX-2的表達(dá)，分析其與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胃癌患者手術(shù)前后及健康志愿者血清periostin蛋白的COX-2的表達(dá)水平，并分析與臨床病理

4、學(xué)參數(shù)的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1)用免疫印跡檢測(cè)了尼古丁處理后胃癌SGC-7901細(xì)胞，periostin蛋白表達(dá)顯著升高；COX-2特異性抑制劑NS398預(yù)處理后的胃癌SGC-7901細(xì)胞，尼古丁對(duì)periostin蛋白的上調(diào)作用幾乎被完全阻斷，同時(shí)單純抑制COX-2也能使periostin蛋白的表達(dá)下調(diào)。
　　 2)應(yīng)用小干擾RNA技術(shù)(siRNA)，在胃癌細(xì)胞SGC7901中特異性沉默periosti

5、n基因的mRNA表達(dá)后，尼古丁處理的胃癌細(xì)胞的增殖速度顯著降低；對(duì)化學(xué)藥物氟尿嘧啶(5-FU)的凋亡敏感性增強(qiáng)，特別是在48h和72h時(shí)的增敏作用更顯著；同時(shí)，無論是對(duì)于未處理細(xì)胞，還是尼古丁處理細(xì)胞，EMT標(biāo)志基因Snail蛋白的表達(dá)均顯著降低。
　　 3)免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)，periostin和COX-2，在胃癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度均顯著高于非胃癌對(duì)照；酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)無論periostin還是COX-2，在胃癌患者血清

6、中的濃度均顯著高于健康人群的血清濃度。
　　 4)通過臨床病理分析，periostin和COX-2的表達(dá)與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤浸潤深度有關(guān)，與腫瘤分化程度與性別無關(guān)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)periostin蛋白表達(dá)在血清和胃癌組織之間缺乏顯著相關(guān)性，但血清和胃癌組織中periostin和COX-2蛋白表達(dá)具有顯著相關(guān)性，手術(shù)后胃癌患者血清periostin和COX-2均顯著降低證實(shí)了相關(guān)聯(lián)系。
　　 結(jié)論：
　　 1)peri

7、ostin是尼古丁在胃癌細(xì)胞中的一個(gè)調(diào)控靶基因，其受尼古丁上調(diào)表達(dá)是COX-2依賴性的。
　　 2)siRNA沉默periostin基因表達(dá)能抑制胃癌細(xì)胞的生長增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，促進(jìn)胃癌細(xì)胞對(duì)化學(xué)藥物凋亡的敏感性。
　　 3)胃癌患者periostin蛋白血清濃度和胃癌組織表達(dá)顯著高于健康人群。在胃癌患者中，具有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤浸潤較深的患者，其血清和胃粘膜periostin蛋白更高。胃癌患者periostin蛋白在行胃