六味地黃丸干預陰虛質(zhì)的臨床觀察及其血漿代謝組學機制研究.pdf

1、背景:
　　陰虛體質(zhì)是由于先天稟賦和后天環(huán)境持續(xù)影響，在生長發(fā)育和衰老過程中形成的以陰虛內(nèi)熱為主要特征的一種偏頗體質(zhì)。陰虛體質(zhì)的主要特征可以概括為以下五個方面①形體特征:體形多瘦長;②心理特征:性情多活潑好動、急躁外向;③常見表現(xiàn):手足心熱，平時易口燥咽干，口渴喜冷飲，面色潮紅，有烘熱感，舌紅少津少苔，兩目干澀，視物模糊，眩暈耳嗚，鼻微干，唇紅微干，皮膚偏干，易生皺紋，脈象細弦或數(shù)，大便干燥，小便短，睡眠差;④發(fā)病傾向:平素易患陰

2、虧燥熱的病變，或病后易表現(xiàn)為陰虧癥狀;⑤對外界環(huán)境的適應(yīng)能力:平素不耐熱邪，不耐燥邪，耐冬不耐夏。
　　有研究發(fā)現(xiàn)，在不同健康狀態(tài)的人群中，中醫(yī)體質(zhì)分布特征存在明顯差異。已經(jīng)有相當多的流行病學研究證實陰虛體質(zhì)與糖尿病、失眠、中風、高血壓、骨質(zhì)疏松等疾病具有一定的相關(guān)性。陰虛質(zhì)、痰濕質(zhì)、濕熱質(zhì)、血瘀質(zhì)及氣郁質(zhì)人群亞健康狀態(tài)構(gòu)成比明顯高于非此類體質(zhì)者。氣郁質(zhì)是形成亞健康狀態(tài)的重要危險因素。四種偏頗體質(zhì)（陰虛質(zhì)、濕熱質(zhì)、血瘀質(zhì)、氣郁質(zhì)）

3、發(fā)展為亞健康狀態(tài)的相對危險度分別是平和質(zhì)的1.618倍、1.585倍、1.611倍、1.891倍。而平和質(zhì)則是一種保護因素。由此我們推測，陰虛質(zhì)與健康狀態(tài)有著密切的聯(lián)系，長期的陰虛體質(zhì)有向病理狀態(tài)轉(zhuǎn)化的可能。因此篩選出陰虛體質(zhì)人群并提前給予干預有著未病先防的重要意義。
　　前期有研究發(fā)現(xiàn)，氣虛質(zhì)與平和質(zhì)人群血漿中對分類貢獻較大的特異性代謝物有11個，包括甜菜堿、脯氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、絲氨酸、組氨酸、丙氨酸、煙酰胺核苷酸、異亮氨

4、酸、門冬氨酸、肌醇。這些差異代謝物與脂肪酸代謝、三羧酸循環(huán)、鳥氨酸循環(huán)、氨基酸代謝、丙酮酸代謝、糖異生、丙氨酸循環(huán)、肌醇代謝、嘌呤嘧啶代謝、氨回收、神經(jīng)遞質(zhì)傳導、甘氨酸和絲氨酸代謝等多個代謝通路相關(guān)。因此，我們推測，同樣作為偏頗體質(zhì)的陰虛質(zhì)也存在代謝紊亂，因此我們篩選出健康陰虛質(zhì)并納入平和質(zhì)作為對照，探索陰虛質(zhì)的代謝特征。并應(yīng)用六位地黃丸對健康陰虛體質(zhì)進行體質(zhì)調(diào)理，探索藥物干預前后陰虛質(zhì)的代謝變化情況。
　　目的:
　　1、

5、明確六味地黃丸及生活方式調(diào)理對陰虛質(zhì)及陰虛質(zhì)人群健康狀態(tài)的影響，為應(yīng)用中醫(yī)藥手段干預中醫(yī)偏頗體質(zhì)提供科學依據(jù)。
　　2、探索陰虛質(zhì)血漿代謝組學特征及相關(guān)差異代謝產(chǎn)物。
　　3、探索六味地黃丸對陰虛質(zhì)代謝的影響及相關(guān)機制。
　　方法:
　　1、陰虛質(zhì)中藥干預研究。應(yīng)用中醫(yī)體質(zhì)量表、健康促進生活方式量表、健康自測及體檢報告進行健康與體質(zhì)狀況判斷，與志愿者進行一對一面談并采用中醫(yī)四診合參，進一步篩選健康人單純陰虛質(zhì)，并

6、將其隨機分為陰虛質(zhì)干預組及對照組。干預組應(yīng)用六味地黃丸干預1個月并結(jié)合中醫(yī)綜合體質(zhì)調(diào)理方案繼續(xù)體質(zhì)調(diào)理，對照組僅給予中醫(yī)綜合體質(zhì)調(diào)理方案。隨訪1年，觀察不同干預方式對入組對象的主要療效指標（陰虛質(zhì)轉(zhuǎn)化分），次要評價指標（健康促進生活方式得分）及健康狀況的改變，通過統(tǒng)計分析主要及次要療效指標，以明確應(yīng)用中藥調(diào)理陰虛質(zhì)的臨床療效，為應(yīng)用中醫(yī)藥手段干預中醫(yī)偏頗體質(zhì)提供科學依據(jù)。
　　2、陰虛質(zhì)與平和質(zhì)代謝組學研究。從參加論文第二章臨床實

7、驗的人群中篩選出陰虛質(zhì)，并納入平和質(zhì)作為對照。清晨空腹抽血后提取血漿-20℃凍存，進行代謝組學特征分析后，進一步對其結(jié)果進行生物信息學分析，建立代謝組差異代謝圖譜庫。
　　3、六味地黃丸干預陰虛質(zhì)前后代謝組學研究。從參加論文第二章臨床實驗的人群中篩選出陰虛質(zhì)人群，對其用藥前后的血漿代謝組進行比較分析，清晨空腹抽血后提取血漿-20℃凍存，進行代謝組學特征分析后，進一步對其結(jié)果進行生物信息學分析，建立代謝組差異代謝圖譜庫。
　　

8、結(jié)果:
　　1.六味地黃丸干預陰虛質(zhì)的臨床觀察研究
　　通過初步調(diào)查、面談、體檢篩選出自愿入組的健康陰虛質(zhì)研究對象68例，其中2例在研究過程中退出，最后完成觀察共66例（干預組和對照組各33例）。分析結(jié)果:主要評價指標:組間比較，在入選基線時期兩組的陰虛體質(zhì)轉(zhuǎn)化分并無明顯差別(F=0.1，P=0.753)，在給予藥物干預1月后陰虛體質(zhì)轉(zhuǎn)化分即出現(xiàn)了明顯下降，與對照組相比有明顯差異(F=5.560，P=0.021),隨后的兩次

9、隨訪6月、12月兩個時間點內(nèi)干預組與對照組相比較差異仍具有顯著性(F=4.095，P=0.047、F=5.687，P=0.020)。組內(nèi)比較，干預組干預前與1月、6月相比差異有顯著性(P=0.020、P＜0.001)，一年后干預組的陰虛體質(zhì)轉(zhuǎn)化分較干預之前明顯下降(44.60±11.75、29.36±15.39，P＜0.001)，而對照組1月與6月、12相比差異有顯著性(P=0.005、P=0.007)。而且干預組與對照組在干預方式與時

10、間上存在交互效應(yīng)(F=3.084，P=0.029)，說明兩組的干預效果隨著時間的延長變化趨勢有所不同。從干預組干預前后體質(zhì)轉(zhuǎn)化分差值來看，干預組與對照組相比均有統(tǒng)計學差異（F=5.906、P=0.018，F(xiàn)=5.437、P=0.023，F(xiàn)=5.841，P=0.019）。組內(nèi)比較，干預組陰虛體質(zhì)轉(zhuǎn)化分呈持續(xù)性下降(F=5.144，P=0.008)，而對照組的陰虛體質(zhì)轉(zhuǎn)化分在干預一個月后仍有小幅度上升，干預6個月后才開始出現(xiàn)下降，但下降幅度

11、仍小于干預組（12.31±16.63、3.70±13.20，P=0.023）。與對照組相比，干預1個月后，干預組在身體、臉部發(fā)熱癥狀方面有所減輕(F=4.700、P=0.034)。
　　2.六味地黃丸及生活方式干預對陰虛質(zhì)健康狀態(tài)的影響
　　干預組自測健康評分轉(zhuǎn)化分在開始干預一個月后即有所上升，差異有顯著性(P=0.019)，而對照組則無明顯變化。從圖1-3中我們可以看到兩組的自測健康評分轉(zhuǎn)化分在開始干預后到第6月的時間內(nèi)均

12、較前有所上升，從6月開始至12月之間自測健康評分轉(zhuǎn)化分有小幅度下降，但是得分水平仍較干預前高。對此我們的解釋是，自測健康評分轉(zhuǎn)化分是從心理、生理、社會等三個方面綜合評估健康狀況，在體質(zhì)轉(zhuǎn)化得分、健康促進生活方式得分變化趨勢相符的情況下（隨著健康促進生活方式得分的升高，陰虛體質(zhì)轉(zhuǎn)化分下降），自測健康評分轉(zhuǎn)化分變化趨勢與之并不十分吻合，這提示我們健康狀況除體質(zhì)情況、生活方式之外仍有其他影響因素，如考試、人際交往困難、家人患病等壓力性事件所造

13、成的心理壓力有關(guān)。進一步對各個維度進行分析，(1)自測生理健康轉(zhuǎn)化分:各時間點組間差異無顯著性，組內(nèi)分析，干預組干預前月與1月、6月、12月相比差異具有顯著性，(P=0.017，P＜0.001，P=0.029)。對照組各個時間點差異均無顯著性。①身體癥狀:干預組在給予藥物干預一月后身體癥狀方面即有所改善，干預前與1月、6月相比差異有顯著性(P=0.029，P=0.004)。對照組各時間點差異均無顯著性。②器官功能:干預組干預前與1月、6

14、月、12月相比差異有顯著性(P=0.012，P=0.007，P=0.001)，對照組干預前與6月、12月相比差異有顯著性(P=0.014，P=0.024)，在給予干預后干預組及對照組均顯示出了干預效果，干預組起效較對照組早。
　　3.陰虛質(zhì)與平和質(zhì)血漿1H NMR分析
　　從論文第二章臨床實驗的健康陰虛質(zhì)人群中篩選出陰虛質(zhì)18人，并納入平和質(zhì)10人，采集清晨空腹血液樣本進行代謝組學檢測，應(yīng)用分析軟件對圖譜進行分析，采用PCA

15、方法對陰虛質(zhì)及平和質(zhì)樣本建模，累計計算出7個主成分，模型參數(shù)R2X=0.641，Q2X=0.256，模型分析了64.1％的原始數(shù)據(jù)。陰虛質(zhì)及平和質(zhì)之間有所分離趨勢，但仍有重合，進一步采用PLS-DA方法進行分析。
　　4.六味地黃丸干預組用藥前后血漿代謝組學研究
　　從論文第二章臨床觀察的陰虛質(zhì)人群中篩選出藥物干預前后陰虛質(zhì)16人，進行用藥前后血漿代謝組學分析，應(yīng)用分析軟件對圖譜進行分析，采用PCA方法對干預組用藥預前后樣本

16、建模，累計計算出5個主成分，模型參數(shù)R2X=0.938，Q2X=0.751，模型分析了93.8％的原始數(shù)據(jù)。干預前后樣本有分離趨勢但仍未完全分開，進一步采用PLS-DA模型進行分析。最終計算出4個主成分，模型參數(shù)R2X=0.524，R2Y=0.996，Q2X=0.832。
　　5.生活方式干預陰虛質(zhì)血漿代謝組學研究
　　從論文第二章臨床觀察的陰虛質(zhì)人群中篩選出藥物干預前后陰虛質(zhì)20人，進行用藥前后血漿代謝組學分析，應(yīng)用分析軟

17、件對圖譜進行分析，采用PCA方法對干預組用藥預前后樣本建模，累計計算出8個主成分，模型參數(shù)R2X=0.927，Q2X=0.705，模型分析了92.7％的原始數(shù)據(jù)。
　　結(jié)論:
　　1.六味地黃丸及生活方式都可以起到改善陰虛質(zhì)的相關(guān)癥狀，對生理健康也可以起到調(diào)理作用，但是生活方式的調(diào)理需要長期堅持才能起效，聯(lián)合藥物調(diào)理起效更快，效果更好。
　　2.與平和質(zhì)相比陰虛質(zhì)血漿內(nèi)與能量、脂肪代謝、三羧酸循環(huán)相關(guān)的氨基酸、脂類、糖

18、等代謝產(chǎn)物明顯升高，可能為陰虛質(zhì)內(nèi)熱表現(xiàn)、形體瘦長的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　3.與平和質(zhì)相比陰虛質(zhì)血漿內(nèi)涉及到神經(jīng)傳遞的氨基酸水平有所上升，提示陰虛體質(zhì)有可能存在某種程度的神經(jīng)細胞抑制與興奮功能的失衡，而這種失衡有可能是陰虛質(zhì)喜動惡靜，性格活潑開朗、失眠等表現(xiàn)的機制之一。
　　4.在給予六味地黃干預后陰虛質(zhì)血漿中與三羧酸循環(huán)相關(guān)的脂類、蛋白、氨基酸、糖類均有所降低。說明六味地黃丸對陰虛質(zhì)的能量代謝紊亂有一定的調(diào)節(jié)作用，從而對于陰虛的