大蒜新素對MCMV感染小鼠IL-12基因轉(zhuǎn)錄、蛋白表達和功能的影響.pdf

1、[目的] ①在整體水平證實大蒜新素抗巨細胞病毒活性和治療效應； ②探明巨細胞病毒感染脾細胞Th1類細胞調(diào)控因子IL-12基因轉(zhuǎn)錄、表達和功能的動態(tài)變化及其在CMV逃避免疫機制中的作用； ③闡明大蒜新素對MCMV感染小鼠脾細胞Th1類細胞調(diào)控因子IL-12基因轉(zhuǎn)錄、表達和功能的影響和其在抗MCMV機制中的作用； [方法] ①MCMV感染動物模型的建立：MCMV經(jīng)小鼠唾液腺增殖傳毒后，選用幼年小鼠，在

2、不使用免疫抑制劑條件下，建立MCMV全身播散型感染小鼠模型(Smith株)，評估心、肺、肝、腎等主要臟器的組織病理改變； ②大蒜新素治療劑量及實驗分組：根據(jù)大蒜新素成人中效劑量(120mg/d)換算出小鼠用藥的一般劑量(25mg/kg·d)。實驗共分為大蒜新素治療組、安慰劑組和正常對照組。在病毒感染和/或藥物處理后3d、5d、7d、10d、14d時取各組小鼠脾組織樣本； ③RT-PCR法檢測各組小鼠脾細胞IL-12p35

3、和IL-12p40mRNA表達強度；④雙抗體夾心ELISA法檢測各組小鼠脾細胞培養(yǎng)上清Th1細胞調(diào)控因子IL-12p70和Th1類細胞因子IFN-γ的蛋白表達水平。 [結(jié)果] ①MCMV播散型感染模型鼠的肝、肺、腎和心臟出現(xiàn)相應的病理損害； ②MCMV播散型感染模型鼠在感染后第3dIL-12p70表達顯著增高，但第5d后急劇下降，顯著低于正常小鼠；IFN-γ在感染后第3d增高達峰值，隨后逐漸下降，在感染后第10d

4、～14d降至正常水平；IL-12p35mRNA水平變化與IL-12p70完全一致；而p40mRNA則從感染第3d開始持續(xù)高水平表達； ③大蒜新素對MCMV感染小鼠脾細胞培養(yǎng)上清細胞因子IL-12p70和IFN-γ表達的影響：大蒜新素在治療后第3dIL-12p70表達到峰值，隨后迅速明顯下降，在治療后第5d～14d基本降至正常細胞水平；IFN-γ在大蒜新素治療第3d達峰值，第5d稍有下降，但隨后表達逐漸上調(diào)，在治療后第7d～14d

5、顯著高于安慰劑組和正常對照組(P＜0.01)； ④大蒜新素對MCMV感染小鼠脾細胞IL-12p35和p40mRNA水平的影響：在治療后第3d，大蒜新素治療組IL-12p35mRNA和IL-12p40mRNA水平均達峰值，與安慰劑組水平相當，明顯高于正常細胞，P＜0.05；隨后二者表達快速下降，在第5d至第14d穩(wěn)定在正常細胞水平(P＞0.05)。 [結(jié)論] ①采用小鼠唾液腺內(nèi)傳毒的方法以恢復MCMVSmith毒株

6、的毒力，有助于建立小鼠巨細胞病毒全身播散性感染模型，為CMV致病機制和治療藥物篩選研究提供良好有效的工作平臺； ②IL-12p35mRNA和IL-12p70水平在MCMV感染5d后持續(xù)明顯下降是感染后期Th1類細胞因子持續(xù)低表達、Th1反應受抑制的主要原因之一；感染后IL-12p40mRNA持續(xù)高表達可能導致IL-12p70拮抗劑(p40)2形成增加，后者可進一步抑制IL-12功能。抑制IL-12的表達和功能可能是CMV感染導致

7、機體Th1/Th2細胞網(wǎng)絡失衡，使宿主特異性細胞免疫功能降低的原因之一，亦可能是CMV逃避機體特異性細胞免疫，持續(xù)感染或長期潛伏在宿主體內(nèi)并在一定條件下引起病理損害的又一重要機制； ③大蒜新素能完全糾正MCMV在感染后第5d～14d誘導的IL-12p70和IL-12p35mRNA表達下調(diào)以及IL-12p40mRNA表達上調(diào)；同時還能持續(xù)上調(diào)感染細胞表達IFN-γ，提示其還可能通過其他途徑促進IFN-γ分泌。大蒜新素的上述作用有助