套袋蘋果梨果實(shí)著色關(guān)鍵酶基因片段克隆與表達(dá)特性研究.pdf

1、本試驗(yàn)以蘋果梨果實(shí)為試材，通過 RT-PCR技術(shù)對(duì)蘋果梨果實(shí)著色關(guān)鍵酶（PAL、CHI、UFGT）基因片段進(jìn)行了克隆，并且采用半定量RT-PCR技術(shù)進(jìn)行了三種酶基因在不同發(fā)育階段的表達(dá)分析研究，以期為進(jìn)一步探明梨果實(shí)著色的分子機(jī)理提供理論依據(jù)。結(jié)果如下：
　　1.改良的CTAB法提取的蘋果梨果皮總RNA出現(xiàn)明顯的28s、18s、5s三條帶，并且28s條帶亮度是18s的2倍，提取RNA的OD260∕OD280值均介于1.8-2.0之

2、間，因此，改良的CTAB法是最理想的提取蘋果梨果皮總RNA的方法。
　　2.根據(jù)PAL、CHI、UFGT基因保守序列分別設(shè)計(jì)一對(duì)特異引物，以蘋果梨果實(shí)cDNA為模板，分別擴(kuò)增得到407bp、444bp、422bp的蘋果梨PAL、CHI、UFGT基因cDNA片段，GeneBank登錄號(hào)分別為JN120855、JN120854、JN120856，長度分別為407bp、444bp、422bp，推斷其分別編碼128、148、131個(gè)氨基酸

3、。
　　3.同源性分析表明，PAL、CHI、UFGT基因序列與大多數(shù)已登錄的園藝植物的這三種酶基因序列同源性都在90％左右，其中PAL基因與鴨梨PAL基因有97%的相似度、CHI基因與砂梨CHI基因有95%的相似度、UFGT基因與西洋梨UFGT基因有99%的相似度；相同氨基酸和相似氨基酸的百分比都在90%左右，相似性較高，說明已成功地克隆出蘋果梨果實(shí)PAL、CHI、UFGT基因片段。
　　4.系統(tǒng)進(jìn)化分析表明，蘋果梨、西洋梨

4、、鴨梨 PAL基因在進(jìn)化上親緣關(guān)系較近；蘋果梨與西洋梨、砂梨 CHI基因在進(jìn)化上親緣關(guān)系較近；蘋果梨與西洋梨UFGT基因親緣關(guān)系最近。
　　5.半定量 PCR結(jié)果表明，隨著果實(shí)的成熟，套袋果與未套袋果 PAL、CHI基因的表達(dá)量都不斷增加，但套袋果在盛花后134天、143天以及147天的表達(dá)量明顯高于未套袋果；UFGT基因在整個(gè)果實(shí)成熟過程中表達(dá)不穩(wěn)定，但套袋果在盛花后125天與盛花后143天的表達(dá)量明顯高于未套袋果，由此可見，套