牛瑟氏泰勒蟲p23表面蛋白基因與牛白細胞介素18基因在原核和真核細胞中的串聯(lián)表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、牛瑟氏泰勒蟲病是由泰勒科、泰勒屬的瑟氏泰勒蟲（Theileria sergenti）寄生于牛的紅細胞以及淋巴細胞內(nèi)，所引起的一種血液原蟲病。近年來隨著養(yǎng)牛業(yè)的不斷發(fā)展，牛瑟氏泰勒蟲病的發(fā)生也呈上升趨勢，嚴重影響相關國家的畜牧業(yè)發(fā)展。但由于目前尚無臨床應用疫苗，而嚴重影響?zhàn)B牛業(yè)的健康發(fā)展。
　　因此，本研究從牛瑟氏泰勒蟲P23表面蛋白基因和牛白細胞介素-18基因著手，根據(jù) GenBank上報道的兩基因核苷酸序列，設計兩對特異引物，利

2、用SOE-PCR技術擴增 p23-IL-18融合基因，將其克隆到 pMD18-T載體，構建pMD18-T-p23-IL-18重組克隆質粒，經(jīng)PCR和酶切鑒定后測序，再將p23-IL-18融合基因亞克隆到 pET-28a原核表達質粒構建 pET-28a-p23-IL-18，并轉化至大腸桿菌進行誘導表達，將表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE和Western blotting分析；以克隆質粒pMD18-T-p23-IL-18為模板，經(jīng)PCR擴增得到

3、用于真核表達的融合基因片段p23-IL-18，并將其克隆到pMD18-T上，在將融合基因亞克隆到真核表達質粒pVAX-I構建pVAXI-p23-IL-18，經(jīng)PCR和酶切鑒定后，將表達轉染至BHK21細胞，收集培養(yǎng)細胞進行RT-PCR及IFA檢測。
　　結果表明，成功克隆了p23-IL-18融合基因，并在大腸桿菌中獲得表達，表達蛋白大小約為48 ku，可被牛瑟氏泰勒蟲陽性血清識別；成功構建了牛瑟氏泰勒蟲 pVAXI-p23-IL-

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