積雪草甙對(duì)人成纖維細(xì)胞增殖及膠原合成影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究羥基積雪草甙(Md)對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞(HSFb)的增殖及膠原蛋白合成的影響。 方法：積雪草甙對(duì)皮膚損傷修復(fù)具有明顯的生物學(xué)作用，但Md的生物活性及其在修復(fù)中的作用機(jī)理卻鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以體外培養(yǎng)的HSFb為研究對(duì)象，對(duì)Md的生物活性進(jìn)行研究，為進(jìn)一步的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。取手術(shù)后剩余的正常皮膚，采用膠原酶消化培養(yǎng)法培養(yǎng)HSFb。原代培養(yǎng)細(xì)胞達(dá)到90％融合狀態(tài)下，按細(xì)胞數(shù)的1：3比例進(jìn)行傳代培養(yǎng)，至第6代時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2、實(shí)驗(yàn)共分2組，對(duì)照組：DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)HSFb；實(shí)驗(yàn)組：應(yīng)用終質(zhì)量濃度分別為10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml、80ug/ml和150ug/ml的含Md的DMEM培養(yǎng)基溶液(2 ml/孔)計(jì)數(shù)培養(yǎng)48h。MTT法研究Md對(duì)HSFb增殖的影響；收集培養(yǎng)細(xì)胞上清液，通過(guò)放射免疫的方法測(cè)定實(shí)驗(yàn)組和空白對(duì)照組細(xì)胞上清中Ⅰ型前膠原氨基端肽原(PI NP)和Ⅲ型前膠原氨基端肽原(PⅢNP)含量。 結(jié)果：細(xì)胞接種后1 d細(xì)胞數(shù)均

3、較低，2 d后兩組HSFb明顯增加，表明該細(xì)胞已進(jìn)人對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，而對(duì)照組HSFb進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期相對(duì)較慢，生長(zhǎng)曲線上顯示，未加入Md的HSFb生長(zhǎng)要比實(shí)驗(yàn)組HSFb慢。Md在10ug/ml～150 ug/ml劑量?jī)?nèi)對(duì)HSFb的生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)細(xì)胞增殖作用。培養(yǎng)48h后實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組均表達(dá)PI NP、PⅢNP，Md實(shí)驗(yàn)組中PI NP、PⅢNP含量隨藥物劑量增加而升高，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組PINP、PⅢNP蛋白合成方面，除10 ug/ml濃度