2型糖尿病大鼠脂聯(lián)素受體mRNA表達(dá)及其與糖脂代謝關(guān)系的研究.pdf

1、目的：本研究采用高脂飼料結(jié)合小劑量鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)一次性腹腔注射誘導(dǎo)正常SD(Sprague-Dawley)大鼠發(fā)生2型糖尿病(T2DM)，制造一種符合人類T2DM發(fā)病特點(diǎn)的動(dòng)物模型，并采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reversetranscriptionpolymerasechainreaction，RT-PCR)的方法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組大鼠骨骼肌組織脂聯(lián)素受體1(AdipoR1)和肝臟組織脂聯(lián)素受體2(Adipo

2、R2)mRNA表達(dá)水平，同時(shí)檢測(cè)大鼠血脂、血糖、胰島素、脂聯(lián)素等糖、脂代謝相關(guān)指標(biāo)，然后進(jìn)行綜合分析，旨在探討T2DM狀態(tài)下影響AdipoRmRNA表達(dá)的因素及其與胰島素抵抗(insulinresistance，IR)的關(guān)系，闡述AdipoR基因表達(dá)與IR相互作用的可能機(jī)理，進(jìn)而了解其與T2DM發(fā)病的關(guān)系。 方法：健康清潔級(jí)近交系SD雄性大鼠20只，體重200～250g，按完全隨機(jī)法分為2組，即對(duì)照組(NC組)、2型糖尿病組(D

3、M組)，每組10只。NC組為正常飼料喂養(yǎng)組，DM組為高脂飼料喂養(yǎng)12周后再給予小劑量STZ(25mg/kg)一次性腹腔注射建立T2DM動(dòng)物模型。大鼠在適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，用相應(yīng)的飼料喂養(yǎng)至第12周末，眶靜脈取血留取血清標(biāo)本檢測(cè)甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)、空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)和脂聯(lián)素(APN)水平。于第13周末將所有大鼠禁食10～12h后，DM組

4、大鼠一次性腹腔注射無(wú)菌STZ(25mg/kg，溶于pH=4.4、0.1M無(wú)菌檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液)造模，NC組腹腔注射相應(yīng)體積的上述檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。第14周末進(jìn)行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OralGlucoseToleranceTest，OGTT)篩選T2DM大鼠。兩組大鼠繼續(xù)相應(yīng)飼料喂養(yǎng)，至第25周末處死所有大鼠，心臟取血留取血清標(biāo)本，分離肝右葉和右后肢股四頭肌組織，用RT-PCR方法檢測(cè)骨骼肌組織AdipoR1mRNA和肝臟組織

5、AdipoR2mRNA表達(dá)水平。試驗(yàn)期間監(jiān)測(cè)大鼠體重，觀察大鼠進(jìn)食、飲水、排尿和活動(dòng)情況。 結(jié)果：1.試驗(yàn)第12周時(shí)DM組血清TG、FINS和LDL-c水平已顯著升高，APN和HDL-c低于NC組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。FBG和TC水平在兩組中無(wú)顯著性差別(P＞0.05)。同時(shí)根據(jù)所測(cè)FBG和FINS水平計(jì)算胰島素敏感性指數(shù)(ISI)評(píng)價(jià)胰島素抵抗程度，即可發(fā)現(xiàn)高脂喂養(yǎng)的SD大鼠其ISI水平顯著低于正常飼料喂養(yǎng)的大

6、鼠，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 2.模型組大鼠經(jīng)高脂飼料喂養(yǎng)加小劑量STZ一次性腹腔注射后血糖升高，用OGTT檢測(cè)0h，0.5h，1h，2h四個(gè)時(shí)點(diǎn)血糖，達(dá)到大鼠糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，且血糖至實(shí)驗(yàn)結(jié)束前始終維持在高水平。NC組大鼠四個(gè)時(shí)點(diǎn)血糖值均未達(dá)到大鼠糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)。 3.造模前兩組大鼠體重均顯著增加，但模型組大鼠體重增加更明顯，與NC組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。造模后，模型組體重逐漸減輕，并出現(xiàn)明顯

7、的多飲、多尿和多食。至試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，DM組血中FBG、TG、TC、FINS和LDL-c繼續(xù)升高并高于NC組，但DM組血清APN和HDL-c繼續(xù)降低并低于NC組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。DM組ISI顯著低于NC組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。血中TC的升高與TG不同步。 4.骨骼肌和肝臟組織中AdipoR的RT-PCR結(jié)果顯示，DM組骨骼肌AdipoR1mRNA的水平顯著低于NC組，DM組肝臟組織AdipoR2m

8、RNA低于NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 5.AdipoR1mRNA和AdipoR2mRNA的表達(dá)水平呈正相關(guān)，并且各自與ISI、APN、HDL-c正相關(guān)，與FBG、TC、TG、LDL-c、FINS負(fù)相關(guān)。 結(jié)論：1.通過(guò)高脂喂養(yǎng)結(jié)合小劑量STZ一次性腹腔注射能夠在沒(méi)有糖尿病遺傳背景的正常SD大鼠中復(fù)制出符合人類T2DM發(fā)病特點(diǎn)的動(dòng)物模型。 2.T2DM狀態(tài)下，AdipoRmRNA表達(dá)減少伴有血糖、血