腦靶向噴昔洛韋微乳的研究.pdf

1、單純皰疹病毒性感染所致腦炎約占全部腦炎的10-20％，由于缺乏有效的藥物治療，一直是中樞神經(jīng)系統(tǒng)病毒感染的研究重點(diǎn)。噴昔洛韋為(Penciclovir PCV)抗單純皰疹病毒的有效藥物，由于給藥后在腦的富集有限，對(duì)腦病毒感染療效差。有研究表明聚氧乙烯蓖麻油有提高血腦屏障通透性的作用。本文以聚氧乙烯蓖麻油Cremophor EL微乳作為載體，探討微乳提高PCV腦內(nèi)分布的可行性。為此，我們借助相圖對(duì)微乳處方工藝進(jìn)行了篩選，并對(duì)微乳體系進(jìn)行了

2、結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、稀釋行為、增溶機(jī)理、體外釋放、急性毒性、體內(nèi)分布靶向性及藥代動(dòng)力學(xué)等研究。 PCV在水中微溶，在油中幾乎不溶。表面活性劑及其水溶液對(duì)PCV有一定的增溶作用；PCV在混合溶劑PEG 400-水(1:1)、丙二醇一水(1:1)中溶解度較高，結(jié)果對(duì)微乳的處方篩選有指導(dǎo)意義。PCV在正辛醇一磷酸鹽緩沖溶液(pH7.4)中的分配系數(shù)log P=一2.015。 采用擬三元相圖，以微乳區(qū)域大小(AMR)，30％總表

3、面活性劑(Stot)的最大增溶油量(MAO30)為指標(biāo)，對(duì)表面活性劑體系進(jìn)行了篩選。結(jié)果表明，磷脂與親水性表面活性劑配伍可使AMR顯著增大。其中，磷脂與Cremophor EL、Brij97和Sodium deoxycholic(去氧膽酸鈉)配伍形成的微乳區(qū)面積最大。經(jīng)優(yōu)化，Cremophor E／lecithin／ethanol(4:1:2)不僅可供注射用且可大大降低表面活性劑用量，被選為制備微乳的Stot。油的分子體積越大，得到的M

4、AO30越?。徊煌鄬?duì)微乳區(qū)域有影響，以丙二醇-水(1:1)作為水相形成的微乳區(qū)域最大。結(jié)合PCV在微乳中的溶解度及空白微乳的毒性，選擇Labrafaccc為油相，丙二醇．水(1:1)為水相制備微乳。溫度(25-60℃)及PCV對(duì)CremophorEL／lecithin／ethanol(4：1：2)體系的相行為無(wú)影響。PCV微乳采用先制備空白微乳再加藥物溶解的方法制備。微乳粘度范圍均在10-50mPa.s內(nèi)，屬牛頓流體(r<'2>>0

5、.9996)。表面活性劑含量對(duì)微乳的粘度影響最大，其次是油含量，兩者含量增加均使粘度增加。微乳的電導(dǎo)率與微乳中表面活性劑含量及水含量的有關(guān)。微乳適當(dāng)稀釋、負(fù)染后在電鏡下觀察，粒徑為20-50nm，與光子分光光度法測(cè)得的粒徑結(jié)果相近。微乳粒徑受稀釋介質(zhì)、稀釋倍數(shù)、放置時(shí)間的影響。隨稀釋倍數(shù)增大放置時(shí)間延長(zhǎng)，粒徑增大。高壓均質(zhì)微乳稀釋后粒徑增大至約200nm，其他自發(fā)微乳稀釋后粒徑均小于100nm。用脈沖場(chǎng)梯度NMR測(cè)定Cremophor

6、EL／lecithin／ethanol(4：1：2)／／Labrafaccc／／丙二醇／水(1：1)體系單相區(qū)Labrafaccc、水、丙二醇及Cremophor EL的相對(duì)自擴(kuò)散系數(shù)(D／D<'o>)。結(jié)果檢測(cè)到雙連續(xù)相的存在，含4％和6％Labrafaccc的微乳為o／w型微乳。 PCV在微乳中的溶解度較水中高3-4倍，從微乳中的釋放呈現(xiàn)緩釋特征，隨微乳中表面活性劑和油用量增大，緩釋特征越明顯。PCV從微乳中的釋放可用雙相

7、動(dòng)力學(xué)方程擬合：先經(jīng)歷一個(gè)快速釋放相，再經(jīng)歷一個(gè)慢速釋放相。 IPM微乳(Stotl6％，油4％)和Labrafaccc微乳(Stot 34％，油6％)的LD<,50>分別為4.80ml／kg、18.44ml／kg。Labrafaccc微乳中Stot和油的量分別為IPM微乳中的2倍和1.5倍，LD<,50>卻為微乳B的3.84倍，提示油顯著影響微乳的安全性。 建立了PCV在小鼠心、肝、脾、肺、腎、腦和血漿中的HPLC測(cè)

8、定方法。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程線性關(guān)系良好(r<'2>>0.999)，方法回收率在98-106％之間，日內(nèi)、日間精密度均小于6％，符合生物樣品測(cè)定的要求。 Cremophor EL微乳PCV-ME4(含油4％)和PCV-ME6(含油6％)表現(xiàn)了明顯的腦靶向特征。與PCV溶液相比，在腦的AUC分別增加了1.6-2.1倍，相對(duì)靶向指數(shù)RTE達(dá)80％。去氧膽酸鈉微乳PCV-MEde和高壓均質(zhì)微乳PCV-MEho無(wú)腦靶向特征，腦相對(duì)靶向效率RTE

9、分別為-22.88％和-10.72％。 提示Cremophor EL微乳具有腦靶向性。腦靶向機(jī)理可能為：1)微乳腦靶向與表面活性劑的種類有關(guān)；2)Cremophor EL微乳提高血腦屏障通透性的機(jī)理可能是Cremophor EL微乳因吸附apo E而偽裝成LDL-微粒，作用于大腦皮層內(nèi)皮細(xì)胞的LDL受體，被大腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞吸收；3)自發(fā)形成的Cremophor EL微乳由于Stot含量高，粒徑小，單位體積微乳覆蓋的Stot

10、量大，吸附的印o E量大，腦靶向性較好。除PCV-MEho，所有微乳均增加了藥物血漿AUC，表現(xiàn)了高生物利用度。PCV-MEde還增加PCV在各組織器官的AUC(2-4高倍于溶液)。PCV-MEho血漿和各組織AUC均明顯下降(除肺部稍增加)，提示藥物在其它臟器分布的可能。 本文Cremophor EL微乳經(jīng)由注射用輔料制備，由于混合表面活性劑的使用大大降低了表面活性劑的用量，體內(nèi)研究表明Cremophor EL微乳提高了PC