龜鹿二仙膏補腎抗衰的實驗研究及“氣助陰生陽長”的理論探討.pdf

1、衰老是機體在發(fā)育成熟后，體內(nèi)各種功能活動進行性下降的過程，它是一種復雜的生命現(xiàn)象。隨著全球老齡化趨向的漸演漸烈，以及生活水平的不斷提高，人們對防治衰老，延年益壽，提高生命活力和生活質(zhì)量有迫切的要求，因此，對衰老本身及伴隨這一過程所出現(xiàn)的一系列機體各個功能層面的下降和疾病的產(chǎn)生，就日益為廣大中外學者所關(guān)注。就目前而言，關(guān)于衰老的發(fā)生機制，仍說法不一，有中毒學說、內(nèi)分泌學說、大腦傷害學說、蛋白質(zhì)變性學說、遺傳學說、程序衰老學說及免疫學說等多

2、種。盡管伴隨衰老機制研究的日漸深入，其相應的干預藥物亦層出不窮，但在實際臨床應用中尚缺乏療效明確而穩(wěn)定的藥物。常用的西藥如維生素類、褪黑激素等存在療效不夠確切和副作用的問題，在臨床應用中受到極大限制，具有悠久歷史和獨特理論體系的中醫(yī)中藥在抗衰老方面受到越來越多的關(guān)注。 祖國醫(yī)學認為五臟虛損尤其是腎衰是衰老的主要生理特征，也是導致衰老的重要原因。五臟虛損日久則累及于腎，腎虛主要包括腎氣和腎中陰陽的虛損，腎虛又導致痰、瘀等病理產(chǎn)物滋

3、生，以至虛實夾雜，變生他病，加速衰老。因此，衰老以虛為本，以實為標。腎衰是衰老的主因，血瘀則是導致衰老的促進因素。因此，本研究從補腎為主，兼以益氣對促進陰陽化生和血液運行的角度立法選定方藥開展研究。 通過對文獻的復習，我們發(fā)現(xiàn)在中醫(yī)藥抗衰老研究中，補腎法為抗衰老研究中的一支生力軍，其中尤以六味地黃丸、腎氣丸、左歸丸、右歸丸等系列組方為研究重點，大量學者從藥理藥效方面開展了原方或拆方的研究，并深入到分子和基因水平進行了探討。初步證

4、明了補腎法是有效的抗衰老途徑之一。而分析上述方劑的配方特點，我們不難發(fā)現(xiàn)它們的共性，即1)全部由植物藥組成，2)方中均含有補和瀉的成分。 與之相比，龜鹿二仙膏的研究相對較少，且研究集中在功效方面為主，較少系統(tǒng)深入的藥理探討。該方的組方特點與上述補腎方不同：1)以“血肉有情之品”為主藥，峻補陰陽，2)全方兼顧補益氣血陰陽，純補而無瀉。因此選定龜鹿二仙膏作為本課題的研究方向。 龜鹿二仙膏首見于《醫(yī)方考·虛損勞瘵門》，由鹿角膠

5、、龜板、枸杞子、人參四味組成(本研究以黨參代人參)，合方精當。方中以“得天地之陽氣最全，善通督脈”之鹿角功壯腎陽，化生精血；“得天地之陰氣最厚，善通任脈”之龜板滋陰潛陽，兼能補血；二藥合為主藥，體現(xiàn)“二物氣血之屬，又得造化之玄微，異類有情”要義。又以“善于固氣”之黨參補益元氣而生津；“善于滋陰”之枸杞子益精生血。四藥合用，性味平和，入五臟而以肝腎為主，又善通奇經(jīng)之任、督，生精、益氣、養(yǎng)血，陰陽并補，且補陰無凝滯之弊，補陽而無燥熱之害。本

6、方乃治療虛證勞損之基本方，文獻記載具有防病延年的良好作用。在既往臨床和實驗研究中本方均表現(xiàn)出良好的補腎陰、壯腎陽、益氣血、抗輻射、抗衰老等多種作用，能顯著提高細胞和體液免疫功能，且本方組方獨具特色，以兩味“血肉有情之品”鹿角和龜板為主藥組方，有別于六味地黃丸，腎氣丸，左歸丸，右歸丸等由植物藥組成經(jīng)典補腎方。為了進一步確證其抗衰老層面的治療效果，探討其可能的效應機理，與此同時，本研究試圖通過原方與去黨參方的比較來探求“氣與陰陽”的中醫(yī)理論

7、，我們開展了本課題的研究。 動物模型方面我們選取了經(jīng)典的D-半乳糖衰老模型，同時將實驗動物隨機分為正常組、模型組、龜鹿二仙膏高(15g成品/kg)、中(10g成品/kg)、低(5g/kg)劑量、龜鹿二仙膏去黨參組共六組做比照觀察。在實驗方面選取了與衰老相關(guān)的系列指標。 ①龜鹿二仙膏對自由基的影響：龜鹿二仙膏各組可明顯提高小鼠血清和大鼠線粒體中SOD、GSH、CAT等指標的活性水平，并使MDA含量顯著降低，從而提高了機體的

8、自由基清除能力，降低了脂質(zhì)過氧化物反應，阻滯了生物分子間的交聯(lián)反應，同時本方還可以明顯改善由于自由基損傷所引發(fā)的機體血粘度升高，紅細胞變形能力的下降等血液動力學改變狀態(tài)，故推測龜鹿二仙膏可能是通過提高清除自由基的能力，延緩線粒體老化并改善機體微循環(huán)障礙而起到抗衰老作用。 ②龜鹿二仙膏對免疫功能的影響：結(jié)果顯示龜鹿二仙膏能夠促進腹腔巨噬細胞吞噬功能、促進脾淋巴細胞增殖效應并增強IL-2活性，與模型組比較有顯著意義。說明龜鹿二仙膏可

9、以通過增加腹腔巨噬細胞吞噬功能，提高胸腺指數(shù)和脾淋巴細胞增殖能力，同時增強IL-2的活性水平以增強機體免疫力，以調(diào)節(jié)機體免疫應答，抵抗不良刺激，改善虛弱狀態(tài)，從而發(fā)揮抗衰老作用。此外，中藥組可明顯降低實驗動物iNOS的基因表達水平，但對IL-6沒有顯著意義，提示我們龜鹿二仙膏阻抗衰老的機制可能主要與抑制和預防NO誘導的氧化應激反應有關(guān)，而對抑制炎癥因子的始動作用、干預自身損傷方面的作用不明顯。 ③龜鹿二仙膏對小鼠原代培養(yǎng)脾淋巴細

10、胞DNA氧化損傷的影響：H2O2可致原代培養(yǎng)的脾淋巴細胞的DNA嚴重損傷，而龜鹿二仙膏各組均能不同程度地降低其損傷效應，并且隨著藥物濃度地增加，抗損傷作用亦逐漸增強，呈現(xiàn)一定的劑量效應關(guān)系。而去黨參組對DNA損傷的抑制作用弱于中、高劑量組，與低劑量組相當。結(jié)果表明，龜鹿二仙膏具有良好的抗DNA損傷作用，去黨參后則效果明顯減弱。 ④龜鹿二仙膏對衰老大鼠垂體細胞增殖的影響：龜鹿二仙膏中、高劑量組均可使垂體細胞3H-酪氨酸摻入量均不同

11、程度增高，提示我們，龜鹿二仙膏可能通過垂體-性腺軸作用，增強垂體細胞轉(zhuǎn)化能力，進而調(diào)節(jié)皮質(zhì)類固醇激素的含量，這可能是其抗衰老的途徑之一。 綜合本研究各項結(jié)果，我們認為龜鹿二仙膏具有良好的抗衰老治療效果，其效用機制可能一方面抗氧自由基損傷，增強免疫功能直接有關(guān)，另一方面又可能通過抗細胞DNA氧化損傷，增強垂體—性腺軸功能等途徑來達到抗衰老的綜合效能。這一結(jié)果，與本方補腎和血，并益陰陽之功甚合。而以陰生陽長，氣固血充，更能化現(xiàn)祖國醫(yī)

12、藥學陰陽互根之奧妙所在，同時也進一步證明了本方補腎抗衰的有效性和科學性。 同時，我們還發(fā)現(xiàn)龜鹿二仙膏去黨參組在抗氧化自由基、降低DNA損傷，改善機體垂體—性腺軸功能等方面與模型組比較雖然具有顯著意義，但其作用強度明顯減弱，與低劑量組相當；而在血液流變學和免疫功能的實驗中，則去黨參組與模型組比較無明顯差異。這與缺乏黨參的補氣之源不無關(guān)系。這一結(jié)果也從反面印證了氣對陰陽和血的化生與運行具有促進作用，初步從實驗角度證明了中醫(yī)“氣助陰生