水稻遺傳轉(zhuǎn)化甘露糖安全篩選體系的建立.pdf

1、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文水稻遺傳轉(zhuǎn)化甘露糖安全篩選體系的建立姓名：王彩芬申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：植物遺傳育種指導(dǎo)教師：付永彩;孫傳清20070601A b s t r a c tT h e p r o d u c ts e c u r i t yi so n e o f t h er e s t r i c t i o nf a c t o r t o t r a n s g e n i ci n d u s t r i a l i z

2、 a t i o n , a n ds e l e c t i o nm a r k e rg e n ei s t h ep r i m a r y p r o b l e m ．S e c u r i t ys e l e c t i o nm a r k e rg e n ei s a s i m p l ea n de f f e c t i v ew a y t os o l v et h es c u r r yp r o

3、b l e mo f s e l e c t i o nm a r k e rg e n e ．A c c o r d i n g t o p m i g e n es e q u e n c ei ng e n eb a n k , t h e6 - p h o s p h o m a r m o s e i s o m e r a s e g e n e o f E s c h e r i c h i a c o l i w a s

4、 a m p l i f i e d b y P C R ．B a s e d o np C A M B I A l 3 0 0 ，t h e p l a n t e x p r e s s i o n v e c t o r w i t h p r a i w a sc o n s t r u c t e d b y s u b s t i t u t i n g p m if o rh y g r o m y c i nr e s

5、i s t a n c e g e n e ．U s i n g e m b r y o —d e r i v e dc a l l u s ，r i c et r a n s f o r m a t i o n w a sc o n d u c t e d b y M i e r o p r o j e c t i l e B o m b a r d m e n ta n db yA g r o b a c t e r i u m -

6、 m e d i a t e d p a t h w a y ．R e s e a r c hh a d b e e n d o n e o nt h e c a l l u s i n d u c t i o n ，t h ep e r c e n t a g e o fr e s i s t a n tc a l l u s a n dt r a n s f o r m a t i o n i n f l u e n c e db

7、ym a n n o s ec o n c e n t r a t i o ni n s e l e c t i o nm e d i u n a ．A l s os o m eo f t h ef a c t o r sc o n n e c t e d w i t ht r a n s f o r m a t i o nh a d b e e nf u r t h e rr e s e a r c h e d ．T h eo p t

8、 i m a lm a n n o s e c o n c e n t r a t i o n a n d t r a n s f o r m a t i o n c o n d i t i o n h a d b e e n c o n f i r m e d ．T r a n s f o r m a t i o n w a sc o n f i r m e db yP C R t h a tt h ep m i g e n eh a

9、 db e e nt r a n s f e r r e dt o p l a n tc e l l ．S o m eo ft h er e s u l t sa r ei nt h ef o l l o w i n g ．1 ．N o n e o f t h e e m b r y o so n m a n n o s e - c o n t a i n i n gm e d i a i n d u c e d c a l l u s

10、o rg e r m i n a t e d ，a n dt h ec a l l u sc a nn o t g r o w o nm a n n o s e —c o n t a i n i n g m e d i a ．2 ．T h e p r o p e rc o n c e n t r a t i o nf o rm a n n o s es e l e c t i o nm a yb e3 0 9 ／l m a n n o

11、s e w i t h5 ∥l s u c r o s ea n d5 剛g l u c o s e ．T h ef r e q u e n c y o f r e s i s t a n t c a l l u sa n d t r a n s f o r m a t i o nw e r e3 5 ．O ％a n d 4 ．2 ％r e s p e c t i v e l y ．3 ．A f t e rc o —c u l t u

12、r e dt w od a y sa t2 6 。Ca n dw i t h o u tw a s h i n g , t h eh i 曲r e s i s t a n tc a l l u sf r e q u e n c y o f4 7 ．1 ％w a s o b t a i n e db y A g r o b a c t e r i u m ·m e d i a t e d p a t h w a y ．4 ．3

13、1 t r a n s g e n i c p l a n t s h a d b e e n o b t a i n e d ，a n d 1 5 o f t h e m a r e P C Rp o s i t i v e ．T h e h i g ht r a n s f o r m a t i o nf r e q u e n c y o f 4 ．2 ％w a so b t a i n e d ．5 ．T h e s e c

14、u r i t yt r a n s f o r m a t i o ns y s t e mb ym a n n o s eh a db e e ne s t a b l i s h e d ．T h i ss y s t e mw o u l db eu s e d i nr i c et r a n s f o r m a t i o nb ys e c u r i t ys e l e c t i o nm a r k e r