TLR2與TLR4在泌尿道的分布及對內毒素侵襲后的表達變化研究.pdf

1、尿路感染是泌尿外科最常見的疾病之一，Maskell估計約50％的女性一生中有過尿路感染，全世界在尿路感染方面的花費也是巨大的，如美國每年用于治療和預防尿路感染的費用高達16億美元。尿路感染的病因有很多，如糖尿病、免疫抑制、妊娠及尿路結構異常等都是目前所知道的尿路感染的易患因素，在尿路感染的眾多病原菌中，由G<'+>菌和G<'->菌引起的尿路感染共占90％左右。但是尿路感染的發(fā)病機制不清楚，尤其是宿主對病原體的識別及信號傳導機制不清。最新

2、研究顯示Toil樣受體(Toll-likereceptor，TLR)不僅與致病菌的識別有關，也與天然免疫的激活有密切關系。TLR的不同亞型可以識別不同的病原體，并通過MyD88等途徑激活機體的免疫系統(tǒng)從而清除病原體。其中TLR2和TLR4分別與G<'+>菌和G<'->菌的識別有非常密切的關系，TLR2分布在細胞表面，能夠識別G<'+>菌的肽聚糖、脂多肽(lipopeptides)和脂蛋白，并激活不同的信號傳導通路，而TLR4是脂多糖(l

3、ipopolysaccharide，LPS)受體復合物的一個非常重要的成分，是對G<'->菌的一個重要的“偵察”部分。目前還沒有尿路上皮TLR分布情況的研究。為此，我們進行了兩個方面的研究。第一，取人腎小管、腎盂、輸尿管和膀胱上皮細胞進行細胞培養(yǎng)，染色鑒定，然后檢測TLR2和TLR4表達分布情況；第二，通過內毒素刺激培養(yǎng)細胞，進一步檢測TLR2和TLR4的表達變化。 主要結果和結論如下： 1、采用Detrisac法獲取腎

4、小管上皮細胞，用膠原酶消化+刀片刮擦法得到腎盂、輸尿管和膀胱的上皮細胞，與單純的組織塊法與酶消化法相比，膠原酶消化+刀片刮擦法能夠更快獲取更多尿路上皮細胞。 2、角蛋白是上皮細胞的標志性蛋白，用SABC法對培養(yǎng)細胞進行角蛋白免疫組化染色，可見細胞角蛋白著色，而對照組不著色。 3、提取各組總RNA，用半定量RT-PCR分析TLR2和TLR4表達分布情況，發(fā)現(xiàn)各組TLR2和TLR4均有表達，其中腎小管組表達量要明顯低于其余各