番茄煤霉病生防融合子的鑒定及拮抗性研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)室以對番茄病原真菌有較好拮抗作用的鏈霉菌菌株A和哈茨木霉T-23兩株遠(yuǎn)緣菌株為出發(fā)菌株，通過原生質(zhì)體融合技術(shù)得到了融合菌株F1、F2、F3、F4、F5、F6。本文通過形態(tài)學(xué)標(biāo)記、細(xì)胞學(xué)標(biāo)記、生化標(biāo)記和分子標(biāo)記分別對融合菌株進(jìn)行鑒定，對融合子的拮抗機(jī)制進(jìn)行了初步的研究，并進(jìn)行了盆栽試驗(yàn)。結(jié)果如下： 通過形態(tài)學(xué)及孢子大小、體積的分析，可初步認(rèn)為融合子F2、F4為重組單倍體。對可溶性蛋白凝膠、酯酶同工酶、過氧化氫同工酶、過氧化物同

2、工酶及超氧化物歧化酶同工酶電泳譜帶進(jìn)行分析，結(jié)果顯示融合菌株F2、F4具有與親本菌株相同的譜帶，亦有明顯的特有譜帶，證明在融合過程中發(fā)生了染色體片斷的交換或基因重組，產(chǎn)生了新組分蛋白。然而，融合子酶蛋白在遺傳繼承上并不平均，F(xiàn)2與親本哈茨木霉T-23相似性更高，F(xiàn)4則更接近于親本鏈霉菌菌株A。RAPD分析顯示融合子中F2與鏈霉菌L-A的相似指數(shù)最高，為50.0％。將融合子與兩親本的相似系數(shù)作比較，可以看出融合子與鏈霉菌L-A更為接近。說

3、明在原生質(zhì)體融合中，融合子從雙親獲得的遺傳信息不等，即較多的遺傳物質(zhì)來源于親本鏈霉菌L-A。以上標(biāo)記證明了融合子的真實(shí)性。 采用SDS-CTAB法、改進(jìn)CTAB法和氯化芐法對真菌基因組DNA提取方法進(jìn)行研究和改進(jìn)，找到一種快速、高效的融合子基因組DNA提取方法，得到適合于分子生物學(xué)研究的高質(zhì)量DNA，即SDS-CTAB法，所提取DNA條帶完整，清晰明亮，濃度約為40μg/mL。 分別測定F2、F4的生長曲線，確定其對數(shù)生

4、長期。分別用平板對峙試驗(yàn)和發(fā)酵濾液抑茵試驗(yàn)兩種方法驗(yàn)證融合子F2、F4對番茄煤霉病菌的抑制效果均好于兩親本。在發(fā)酵濾液抑菌試驗(yàn)中，F(xiàn)2發(fā)酵濾液沒有明顯的抑菌現(xiàn)象，說明融合子F2可能不是以產(chǎn)抗生素作用為主，而是競爭與重寄生作用。因此，通過掃描電鏡觀察了融合子與病原真菌菌絲間的相互作用。測定四種拮抗菌的發(fā)酵濾液對番茄煤霉病菌的產(chǎn)孢量及萌發(fā)率的影響，融合子F4發(fā)濾液的抑制率最高為77.06％。 測定了發(fā)酵原液對番茄種子萌發(fā)的影響并進(jìn)行