利用根部吸收法進(jìn)行病毒誘導(dǎo)基因沉默的初步探索.pdf

1、本論文選用煙草脆裂病毒(TRV)和煙草為實(shí)驗(yàn)材料，選擇煙草八氫番茄紅素去飽和酶基因(PDS)作為報(bào)告基因，以該基因沉默產(chǎn)生的植物葉片出現(xiàn)典型的光漂白現(xiàn)象，進(jìn)行觀察。構(gòu)建八氫番茄紅素去飽和酶基因(PDS)的病毒載體，侵染結(jié)果顯示目的基因PDS沉默導(dǎo)致煙草幼苗出現(xiàn)光漂白現(xiàn)象．采用RT-PCR的方法檢測目的基因PDS的沉默效果．結(jié)果顯示PDS基因mRNA被顯著降解。該體系的建立有利于將來對植物基因進(jìn)行高通量功能分析。 根部吸收法操作簡

2、單，快速有效。通過用含有病毒載體的農(nóng)桿菌直接侵染植物的根部，在短期內(nèi)，被侵染的植物就能發(fā)生目的基因的沉默。此方法可對注射法無法接種的更小幼苗進(jìn)行接種，因此適用的植物范圍更廣，適用于大規(guī)?；蚬δ芊治?。 為了使VIGS技術(shù)大規(guī)模應(yīng)用于植物基因功能研究，以及探討VIGS技術(shù)用于植物發(fā)育相關(guān)基因功能研究的可行性，本實(shí)驗(yàn)對農(nóng)桿菌介導(dǎo)的病毒誘導(dǎo)基因沉默體系進(jìn)行了優(yōu)化，探討了農(nóng)桿菌的接種濃度，接種植物的苗齡對病毒誘導(dǎo)基因沉默效率的影響。結(jié)果