PPARγ激動(dòng)劑15d-PGJ-,2-對(duì)人甲狀腺細(xì)胞存活和凋亡的影響.pdf

1、目的：本研究應(yīng)用甲狀腺刺激抗體(TSAb)刺激體外培養(yǎng)的甲狀腺細(xì)胞，分析過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)在TSAb作用下人甲狀腺細(xì)胞中的表達(dá)情況，并初步探討PPARγ激動(dòng)劑15-脫氧-△12，14-前列腺素J2(15d-PGJ2)對(duì)TSAb作用下人甲狀腺細(xì)胞存活和凋亡的影響。
　　 方法：應(yīng)用原代培養(yǎng)人甲狀腺細(xì)胞為研究對(duì)象，TSAb作用細(xì)胞24h后，采用實(shí)時(shí)定量PCR法和Western-blot法分別檢測(cè)TSAb組(2

2、mg/mlTSAb陽(yáng)性血清粗提IgG培養(yǎng))、TSAb陰性組(2mg/ml正常人血清粗提IgG培養(yǎng))及對(duì)照組(無(wú)血清的1640培養(yǎng)基培養(yǎng))甲狀腺細(xì)胞中PPARγ的表達(dá)情況；不同濃度15d-PGJ2(0、5、10、20、40μ mol·L-1)分別干預(yù)0、1224、48h后，應(yīng)用MTT法檢測(cè)甲狀腺細(xì)胞的存活率；干預(yù)24h后，利用Hoechst-PI染色熒光顯微鏡觀測(cè)細(xì)胞凋亡形態(tài)、Annexin-V-FITC/PI染色流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定細(xì)胞凋亡

3、率。同時(shí)應(yīng)用PPARγ拮抗劑GW9662阻斷PPARγ途徑，觀察15d-PGJ2對(duì)TSAb作用下甲狀腺細(xì)胞凋亡的變化。
　　 結(jié)果：⑴PPARγmRNA及其蛋白在TSAb組、TSAb陰性組及對(duì)照組甲狀腺細(xì)胞中均有表達(dá)，而在TSAb作用下甲狀腺細(xì)胞中的表達(dá)顯著低于TSAb陰性組和對(duì)照組(P＜0.05)。⑵15d-PGJ2呈濃度和時(shí)間依賴(lài)性抑制TSAb作用下甲狀腺細(xì)胞的存活，抑制高峰為20μ mol·L-115d-PGJ2作用24h

4、;5-40μ mol/L15d-PGJ2對(duì)TSAb作用下甲狀腺細(xì)胞有促進(jìn)凋亡作用(p＜0.05)，并呈劑量依賴(lài)關(guān)系；10μmol/LPPARγ拮抗劑GW9662能拮抗20μmol/L15d-PGJ2對(duì)TSAb作用下甲狀腺細(xì)胞的凋亡作用(p＜0.05)。
　　 結(jié)論：①PPARγ在TSAb作用下甲狀腺細(xì)胞中的表達(dá)是顯著降低的，作為GD主要致病因子的TSAb，可能通過(guò)抑制PPARγ而使細(xì)胞增殖增多、凋亡受抑制。②PPARγ激動(dòng)劑15