4-1BBL胞膜外區(qū)蛋白及四價抗CD3-抗Pgp雙功能抗體的抗耐藥腫瘤作用研究.pdf

1、抗CD3×抗Pgp(anti-CD3/anti-Pgp)diabody治療P-糖蛋白(P-glycoprotein，Pgp)高表達(dá)的多藥耐藥(Multidrug resistance，MDR)腫瘤具有良好應(yīng)用前景，其殺傷腫瘤的作用主要由外周血淋巴細(xì)胞(peripheral blood lymphocyte，PBL)中活化的細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)來完成。因此，采用促進(jìn)T細(xì)胞活化的策略可進(jìn)一

2、步增強(qiáng)PBL的抗腫瘤效果。本文從兩方面進(jìn)行了相關(guān)的研究。 1.利用可溶型4-1BBL促進(jìn)PBL活化4-1BB/4-1BBL作為一對重要的共刺激信號分子，通過促進(jìn)活化的細(xì)胞毒淋巴細(xì)胞增殖、減少凋亡、延長存活時間、甚至增加細(xì)胞內(nèi)顆粒酶、穿孔素的蓄積等機(jī)制調(diào)節(jié)T細(xì)胞活化，有助于機(jī)體達(dá)到最佳狀態(tài)的抗腫瘤細(xì)胞免疫反應(yīng)。 本文第一部分用原核表達(dá)的可溶型人4-1BBL胞膜外區(qū)蛋白(extracellular domain of hum

3、an 4-1BBL，ex4-1BBL)來調(diào)節(jié)PBL的抗腫瘤反應(yīng)。用免疫組化、PI染色和放射免疫法確認(rèn)4-1BBL胞膜外區(qū)蛋白具有與4-1BB特異結(jié)合、減少Jurkat細(xì)胞凋亡和促進(jìn)其釋放IL-2活性后，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)該蛋白能夠促進(jìn)PBL增殖(191.66％ vs 146.67％，P<0.05)和分泌I1-2(54.26±5.92 pg/ml vs 22.57±6.53 pg/ml，P<0.05)，使PBL釋放的乳酸脫氫酶(LDH)減少，

4、改善其存活狀態(tài)。在體外細(xì)胞毒殺傷實(shí)驗中，4-1BBL胞膜外區(qū)蛋白聯(lián)合anti-CD3/anti-CD20或anti-CD3/anti-Pgp微型雙功能抗體，在不同的效靶比均能增強(qiáng)PBL對靶向細(xì)胞(Raji或K562/A02)的殺傷作用。在體內(nèi)聯(lián)合應(yīng)用PBL、4-1BBL胞膜外區(qū)蛋白和anti-CD3/anti-Pgp diabody治療裸鼠K562/A02移植瘤，能顯著控制腫瘤生長并清除腫瘤，觀察至100天未見腫瘤復(fù)發(fā)。 因此，

5、4-1BBL胞膜外區(qū)蛋白作為一種免疫調(diào)節(jié)蛋白，能夠促進(jìn)T細(xì)胞的活化，進(jìn)而增強(qiáng)基于PBL的抗腫瘤生物治療的效果。4-1BBL胞膜外區(qū)蛋白可能成為一種新型的、應(yīng)用廣泛的輔助抗腫瘤藥物。 2.構(gòu)建四價形式的anti-CD3/anti-Pgp雙功能抗體雙功能抗體也稱為雙特異抗體(bispecific antibody，BsAb)，其四價結(jié)構(gòu)能夠增加分子量和結(jié)合域，延長半衰期和增加結(jié)合力，間接延長抗體的作用時間。同時，增加對T細(xì)胞CD3分