多倍體腫瘤的發(fā)生與耐藥的相關性研究.pdf

1、目的:
　　 惡性腫瘤嚴重威脅人類健康，化療作為惡性腫瘤綜合治療中必不可少的方法，在臨床治療中發(fā)揮著重要作用。紡錘絲毒性藥物（如紫杉醇、多西他賽等）是婦科腫瘤治療中常用的一線化療藥物。在臨床工作中我們觀察到:在化療初始階段，腫瘤一般對所用藥物敏感，但在隨后的不同階段多數(shù)腫瘤會出現(xiàn)耐藥、復發(fā)，還有部分腫瘤甚至在初始治療的過程中就出現(xiàn)耐藥。
　　 腫瘤耐藥的機制是復雜多樣的，關于紡錘絲毒性藥物的耐藥機制的研究目前多集中在多藥

2、耐藥基因與腫瘤耐藥的關系方面。課題組前期研究發(fā)現(xiàn):在體外培養(yǎng)中，有些腫瘤細胞在接受紡錘絲毒性藥物治療過程中除部分以凋亡告終外，還有部分腫瘤細胞并不表現(xiàn)為凋亡現(xiàn)象，而是以形成多倍體（四倍體甚至八倍體）細胞為特征;這些多倍體腫瘤細胞不僅沒有被化療藥物所殺滅，反而在短暫調整后繼續(xù)進行DNA的復制，他們不但可以長期存在，同時表現(xiàn)出了對多種不同作用機制的藥物更強的耐藥性，我們推測，這些化療篩選后的“幸存者”是腫瘤耐藥、復發(fā)的根源之一。國外的一些研

3、究也報道了相似的結果:多倍體腫瘤細胞具有高度的遺傳不穩(wěn)定性，對放化療均極不敏感，具有多倍體亞克隆的腫瘤預后更差。因此我們提出“紡錘絲毒性藥物誘導形成的多倍體腫瘤是耐藥的重要表現(xiàn)或又一重要機制”這一假說。
　　 課題的前期研究初步探討了多倍體腫瘤細胞發(fā)生凋亡逃逸及耐藥的可能機制，發(fā)現(xiàn):在紡錘絲毒性藥物誘導產(chǎn)生多倍體腫瘤細胞過程中，凋亡通路的異常，特別是抗凋亡基因Bcl-2的異常表達起著重要的作用;在多倍體耐藥中，同樣發(fā)現(xiàn)Bcl-2

4、的異常表達起著重要的調控作用。作為紡錘絲毒性藥物發(fā)揮細胞殺傷作用的主要途徑，凋亡通路上各調控點的正常運作起著至關重要的作用。有實驗表明，Bcl-2作為凋亡的各種信號轉導途徑的共同通路或交匯點，可增強細胞對大多數(shù)DNA損傷因子的抵抗性，抑制大多數(shù)化療藥物所引起的靶細胞凋亡。這與我們的實驗結果一致，因此提示:抗凋亡基因Bcl-2的高表達在多倍體腫瘤形成及耐藥過程中的調控作用，很可能成為后續(xù)研究對抗多倍體耐藥的重要切入點。
　　 那么

5、臨床中，經(jīng)紫杉醇等紡錘絲毒性藥物治療后耐藥、復發(fā)的腫瘤是否也出現(xiàn)上述變化——形成多倍體？本研究擬通過臨床腫瘤組織實驗，進一步探討經(jīng)紡錘絲毒性藥物治療后腫瘤DNA倍體的變化（多倍體腫瘤的形成）與耐藥發(fā)生的關系，及抗凋亡基因Bcl-2的表達在多倍體腫瘤的形成及耐藥發(fā)生中的意義。
　　 方法:
　　 收集15例臨床經(jīng)紡錘絲毒性藥物治療前后的同一患者的腫瘤組織病理（包括復發(fā)耐藥及正在進行新輔助化療的兩類患者），應用熒光原位雜交技

6、術檢測經(jīng)紡錘絲毒性藥物治療前、后DNA倍體的改變情況，同時，應用免疫組織化學法檢測化療前、后組織中抗凋亡基因Bcl-2的表達情況。
　　 結果:
　　 1、復發(fā)耐藥腫瘤中DNA倍體的改變與Bcl-2的表達情況
　　 復發(fā)耐藥組共9例，與化療前相比，復發(fā)耐藥后腫瘤組織中多倍體細胞數(shù)目的增加具有統(tǒng)計學意義（P=0.001）;Bcl-2在耐藥組織中的表達較化療前明顯升高，且與多倍體細胞數(shù)目的增加具有顯著的正相關關系（r

7、=0.791，P＜0.05）。
　　 2、新輔助化療組DNA倍體改變及Bcl-2表達情況
　　 新輔助化療組共6例，化療后多倍體數(shù)目增加者4例，對應Bcl-2表達增高者3例，其中2例在隨后化療中發(fā)生耐藥（均在第7療程后出現(xiàn)耐藥）;多倍體數(shù)目未增加者2例，對應Bcl-2表達未增高者1例。
　　 結論：
　　 1、經(jīng)紡錘絲毒性藥物治療后腫瘤的倍體變化（多倍體腫瘤的形成）可能是耐藥的重要標志及原因之一;