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文檔簡介
1、菰(Zizania latifolia Turcz.),宿根水生草本植物。經(jīng)黑粉菌侵染后莖基部膨大形成茭白,是一種重要的水生種質(zhì)資源,在育種實踐中發(fā)揮著重要作用。三江平原野生菰種類繁多,但因過度開墾使得生物多樣性遭到嚴重的破壞。為了明晰野生菰的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu),本文在優(yōu)化菰的序列相關(guān)多態(tài)性(SRAP)反應體系的基礎上,對三江平原9個居群的菰進行遺傳變異、居群結(jié)構(gòu)評估,以期為菰種質(zhì)資源評價、遺傳多樣性分析及遺傳圖譜構(gòu)建等相關(guān)的研究提供
2、技術(shù)支持。主要結(jié)果如下:
1、菰SRAP-PCR反應體系的優(yōu)化與建立為了有效利用SRAP標記研究野生菰資源的遺傳變異,以長江中下游龍感湖(N30°13′48″,E116°15′40″)和三江平原黑龍江沿岸(N49°12′15″,E129°43′27″)2個居群菰的幼嫩葉片為試材,利用單因素分析法對影響菰SRAP-PCR擴增效果的Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶、DNA模板和引物濃度等5種因素進行了優(yōu)化。結(jié)果表明,適宜菰
3、基因組的SRAP-PCR反應體系為1μL10×Buffer,0.5UTaqDNA聚合酶,2mmol·L-1 MgCl2,50 ng模板DNA,0.20 mmol·L-1 dNTPs,正向和反向引物濃度均為0.7 mol·L-1,共10μL。同時選取5對引物,利用該體系對72份菰樣本進行PCR擴增,共獲得132條清晰譜帶,其中91條具有多態(tài)性,比率為68.9%,說明建立的反應體系譜帶清淅,多態(tài)性高且穩(wěn)定可靠,可用于進一步的遺傳分析。
4、> 2、三江平原菰SRAP遺傳多樣性分析以三江平原9個居群野生菰(共206個樣品)的嫩葉為試材,運用POPGEN和HICKORY version1.0軟件計算每個居群的遺傳多樣性參數(shù);采用TFPGA軟件構(gòu)建系統(tǒng)樹,同時運用ARLEQUIN2.0和2MOD軟件進行AMOVA分子變異和基因流-漂變平衡分析。對菰進行遺傳變異、居群結(jié)構(gòu)評估結(jié)果顯示,利用5對引物擴增產(chǎn)生了344個條帶,其中311條具有多態(tài)性(多態(tài)率為90.41%)。居群內(nèi)高的
5、近交率(FIS=0.793)導致遺傳多樣性水平比較低(Pp=58.8%,He=0.156,I=0.244)。通過幾種不同方法驗證的F統(tǒng)計量都一致,表明居群之間有較大的遺傳分化(約為總遺傳變異的30%)。由貝葉斯方法中FST和共祖模擬分析的F值計算的基因流都表明居群之間的基因交流較小(Nm=0.609,M=0.600)。由于生境的嚴重片斷化,在菰居群中遺傳漂變比基因流對遺傳結(jié)構(gòu)的影響更大。依據(jù)以上結(jié)果,我們認為對于現(xiàn)有基因組類型的菰都應該
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