間歇性低溫刺激對ApoE基因缺陷小鼠動脈粥樣硬化斑塊結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、背景:
　　動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)在大于40歲的男性中發(fā)病率約為66％，在大于40歲的女性中發(fā)病率約為50％。在臨床上，其主要分為冠狀動脈粥樣硬化、腦血管粥樣硬化、外周血管粥樣硬化等。冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(coronary heart disease，CAD)是嚴(yán)重影響人類生命健康的疾病。據(jù)統(tǒng)計，大約60％的死亡由心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)造成。在我國，心血

2、管病人的患病率處于持續(xù)上升階段，據(jù)統(tǒng)計目前已達(dá)2.3億人次，也就是說平均每5個成年人中就有1人患有心血管疾病。全國每年死于心血管疾病的患者多達(dá)350萬。冠狀動脈粥樣硬化斑塊分為穩(wěn)定斑塊和易損斑塊。據(jù)以往研究證實(shí)，急性冠脈綜合征(acute coronarysyndrome，ACS)的發(fā)生主要是因?yàn)楣跔顒用}易損斑塊的破裂所致，而易損斑塊的主要病理特征就是斑塊表面的一層薄的纖維帽?；|(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteina

3、se，MMP)可以降解細(xì)胞外基質(zhì)，在AS斑塊細(xì)胞外基質(zhì)的重構(gòu)發(fā)揮重要作用，可誘導(dǎo)斑塊破裂，誘發(fā)ACS。而基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(Tissue inhibitor of matrix metalloproteinase，TIMP)是MMPs的內(nèi)源性特異性抑制因子，對于MMPs的活性抑制發(fā)揮重要作用。
　　據(jù)流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，冠心病的死亡事件與周圍環(huán)境的溫度密切相關(guān)，隨著周圍環(huán)境溫度的下降，急性冠脈綜合征的發(fā)病率亦隨之上升。在臨床工作中

4、同樣會發(fā)現(xiàn)，在嚴(yán)寒的冬天，各類心血管病的發(fā)病率及死亡率都會上升。但是低溫導(dǎo)致急性冠脈綜合征發(fā)病率上升的具體機(jī)制尚不明確。于是我們提出這樣一個假設(shè):長期的低溫刺激導(dǎo)致斑塊的失穩(wěn)與動脈粥樣硬化斑塊的纖維帽變薄有聯(lián)系。
　　目的:
　　嚴(yán)寒的冬天與ACS的發(fā)生密切相關(guān)，但是其確切機(jī)制尚不清楚，為了在嚴(yán)寒的冬天做好急性冠脈綜合征的防治工作，本實(shí)驗(yàn)旨在探討低溫導(dǎo)致急性冠脈綜合征發(fā)病率上升的機(jī)制。
　　方法:
　　將20只8

5、周齡雄性ApoE基因缺陷小鼠（apolipoprotein E-deficient，ApoE-/-）被隨機(jī)分為對照組(n=10)及實(shí)驗(yàn)組(n=10)，實(shí)驗(yàn)組ApoE基因缺陷小鼠每天有4小時處于4±1℃環(huán)境中（每天8:00到11:00），其余時間處于24±2℃環(huán)境中，對照組ApoE基因缺陷小鼠全天處于24±2℃環(huán)境中。經(jīng)過8周的低溫干預(yù)后，測定兩組ApoE基因缺陷小鼠的以下指標(biāo):
　　1)、采用電子稱了解兩組ApoE基因缺陷小鼠的體

6、重情況;
　　2)、采用酶法及直接選擇法測定兩組APOE基因缺陷小鼠的空腹血脂，包括甘油三酯(Total cholesterol，TG)、總膽固醇(Triglycerides，TG)，低密度脂蛋白膽固醇(Low-density lipoprotein Cholesterol，LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(High-density lipoprotein Cholesterol，HDL-C);
　　3)、使用羅氏血糖儀測定

7、兩組ApoE基因缺陷小鼠空腹血糖(fastingblood glucose，F(xiàn)BG);
　　4)、取ApoE基因缺陷的小鼠主動脈行Western Blot，了解小鼠主動脈中MMP2/3/9/14，TIMP1/2的表達(dá)量;
　　5)、ApoE基因缺陷小鼠主動脈根部切片行HE染色比較兩組小鼠動脈粥樣硬化斑塊的大小;
　　6)、APOE基因缺陷小鼠主動脈根部切片行Masson染色比較兩組小鼠動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)膠原含量;

8、>　　7)、兩組ApoE基因缺陷小鼠主動脈根部行MOMA2、CD3、α-SMA免疫組化染色，比較兩組小鼠主動脈根部動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞(macrophagocyte)、淋巴細(xì)胞(leukomonocyte)和血管平滑肌細(xì)胞(vascularsmooth muscle cells，VSMC)的含量。
　　結(jié)果:
　　8周的低溫干預(yù)后，兩組ApoE基因缺陷小鼠間體重、血脂、血糖無明顯差異(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)組ApoE基因

9、缺陷小鼠主動脈根部動脈粥樣硬化斑塊面積要大于對照組(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)組ApoE基因缺陷小鼠主動脈根部動脈粥樣斑塊內(nèi)膠原及血管平滑肌細(xì)胞含量低于對照組，淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞含量高于對照組(P＜0.05或P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)組ApoE基因缺陷小鼠主動脈內(nèi)MMP2、MM9、MMP14表達(dá)量高于對照組(P＜0.05或P＜0.01)，TIMP1的表達(dá)量低于對照組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.間歇性低溫刺激不會影響ApoE基

10、因缺陷小鼠體內(nèi)的糖脂代謝;
　　2.間歇性低溫刺激會導(dǎo)致ApoE基因缺陷小鼠動脈粥樣硬化斑塊的進(jìn)展;
　　3.間歇性低溫刺激會影響ApoE基因缺陷小鼠動脈粥樣硬化斑塊的結(jié)構(gòu)組成，主要是降低動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)血管平滑肌細(xì)胞及膠原的表達(dá)，增加巨噬細(xì)胞及淋巴細(xì)胞的表達(dá)，從而導(dǎo)致動脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定;
　　4.間歇性低溫刺激導(dǎo)致ApoE基因缺陷小鼠動脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定是通過提高M(jìn)MP的表達(dá)，降低TIMP的表達(dá)，從而造成