晝夜節(jié)律紊亂對成體乳腺干細胞的影響.pdf

1、2007年，WHO國際癌癥研究所確認，倒班能夠引起人體生理節(jié)奏紊亂，是人類可能的致癌危險因素（2A級）。其中影響倒班工人生理節(jié)奏紊亂的重要危險因素是夜光暴露，長期夜光暴露引起人體內(nèi)激素分泌紊亂，可能導致各種癌癥及其他疾病發(fā)生。近年來，晝夜節(jié)律紊亂作為乳腺癌的危險因素之一，已經(jīng)受到廣泛的關(guān)注。多項流行病學研究發(fā)現(xiàn)，女性長期晝夜節(jié)律紊亂，其乳腺癌的發(fā)病危險性增高，但其致病機制尚未確定。
　　目的：
　　本研究模擬日常生活中晝夜節(jié)

2、律紊亂，將兩月齡Balb/c小鼠進行長期光照暴露，通過研究激素水平，乳腺表觀形態(tài)，乳腺干細胞數(shù)量和功能以及蛋白水平的變化來探討晝夜節(jié)律紊亂與乳腺癌的關(guān)系。
　　方法:
　　本研究光照方案參照國內(nèi)外最新的輪班制度，共分為四個組:L/D對照組(光照08:00-20:00，黑暗20:00-08:00); D/L處理組(光照20:00-08:00，黑暗08:00-20:00); Shift處理組（周一:光照08:00-15:00，黑

3、暗15:00-08:00;周二:光照15:00-22:00，黑暗22:00-08:00;周三:光照08:00-15:00，黑暗15:00-08:00;周四，周五:光照22:00-08:00，黑暗08:00-22:00;周六，周日:光照08:00-20:00，黑暗20:00-08:00）;LL處理組(光照:13:00-09:00，黑暗09:00-13:00)。兩月齡的Balb/c小鼠隨機分成四個組后進行8個月長期光照暴露，實驗終止時間為光

4、照8個月立即處理和滯后兩個月處理。
　　本實驗研究內(nèi)容分為兩部分:
　　第一部分研究晝夜節(jié)律紊亂對小鼠生殖器官，乳腺表觀形態(tài)，激素水平和蛋白水平的影響。
　　第二部分是對乳腺干細胞進行體外定性和定量分析，以查看長期晝夜節(jié)律紊亂對乳腺干細胞數(shù)量和比例的影響。同時，利用乳腺干細胞體內(nèi)移植再生實驗來驗證長期晝夜節(jié)律紊亂對乳腺干細胞功能的影響。
　　結(jié)果:
　　本研究第一部分結(jié)果顯示，光照8個月立即處理的小鼠，卵巢

5、重量明顯減少，在LL處理組中顯著性減少，而在滯后效應中又得到恢復，在滯后效應中，D/L，Shift處理組子宮重量顯著性增加。激素水平結(jié)果顯示，D/L處理組睪酮，去甲腎上腺素含量顯著性增加，Shift處理組雌二醇，腎上腺素含量顯著性增加;滯后效應中，D/L處理組睪酮含量顯著性增加，LL處理組血管緊張素Ⅱ顯著性增加。乳腺分支點和導管增生在D/L，Shift處理組中都顯著性增加，且在滯后效應中不可恢復。細胞因子檢測結(jié)果表明，三個處理組中G-C

6、SF都顯著性減少，而IGF-BP-3都顯著性增加，LIX在D/L，LL處理組中顯著性增加，PF4在Shift，LL處理組中顯著性增加，Shift處理組中MIG，IL1-alpha顯著性增加，LL處理組中Eotaxin-2顯著性減少。免疫組化實驗結(jié)果表明，處理組中COX2，ER，PR陽性表達率均大于對照組。
　　第二部分結(jié)果顯示，長期晝夜節(jié)律紊亂使得小鼠乳腺上皮細胞數(shù)目和比例減少。Shift處理組干細胞比例明顯增加，LL處理組干細胞

7、比例明顯減少。經(jīng)流式細胞儀分選的細胞群形成的乳腺微球種植在基底膜基質(zhì)中能夠進一步分化形成特定的3D結(jié)構(gòu)，體內(nèi)移植再生實驗證明這些3D結(jié)構(gòu)能夠生成新的再生乳腺。而三個處理組移植再生率都有所降低，Shift處理組中再生乳腺組織增生比例顯著性增加。滯后效應中，D/L，Shift處理組再生乳腺組織增生比例顯著性增加。
　　結(jié)論:
　　晝夜節(jié)律紊亂增加小鼠體內(nèi)性激素水平，減緩生殖器官的發(fā)育，增加乳腺側(cè)枝形成和乳腺導管增生。改變小鼠乳腺