不同誘因急性肺損傷模型大鼠肺內(nèi)外炎癥動(dòng)態(tài)變化.pdf

1、目的：急性肺損傷是一常見病和多發(fā)病，較高的病死率引起人們關(guān)注，它的發(fā)病機(jī)制到目前為止還不是十分清楚。本研究通過尾靜脈注射脂多糖和氣管內(nèi)滴入大腸桿菌來模擬肺內(nèi)外兩種模型，觀察這兩種模型中的炎癥反應(yīng)有何不同，并觀察小劑量糖皮質(zhì)激素對(duì)這兩種模型治療效果有何不同。從而更好的指導(dǎo)臨床中急性肺損傷的治療。
　　 方法：清潔級(jí)雄性SD大鼠112只，按隨機(jī)數(shù)字表法分為14組：尾靜脈注射生理鹽水1ml對(duì)照組、尾靜脈注射脂多糖(LPS8mg/kg)

2、2h、4h、6h模型組、氣管內(nèi)滴入大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株懸液(E.coli，5.0×109cfu/ml，3ml/kg)12h、24h、36h模型組，NS+Dex組及LPS2h+Dex組、4h+Dex組、6h+Dex組、E.coli12h+Dex組、24h+Dex組、36h+Dex干預(yù)組，每組8只動(dòng)物。干預(yù)組在造模結(jié)束后立即腹腔內(nèi)注射地塞米松(2mg/kg)。
　　 10％水合氯醛腹腔注射麻醉(3ml/kg)，股動(dòng)脈放血收集血液，離心（

3、3000rpm，4℃，10min），吸取上清，-80℃保存，檢測(cè)血清中TNF-α的含量。開胸處死動(dòng)物后，取右肺中葉測(cè)定肺的濕干比；取右肺下葉，10％中性福爾馬林溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，切片，HE染色，觀察肺組織病理形態(tài)學(xué)變化并評(píng)分，經(jīng)氣管插管行左肺支氣管肺泡灌洗，取支氣管肺泡灌洗液(BALF)，離心(1200rpm，4℃，10min)，吸取上清，-80℃保存，檢測(cè)BALF中TNF-α、蛋白的含量。細(xì)胞沉淀懸浮于200μl生理鹽水中，進(jìn)行

4、白細(xì)胞計(jì)數(shù)。
　　 結(jié)果：
　　 1、肺組織病理形態(tài)學(xué)：光鏡下觀察LPS2h后開始出現(xiàn)肺血管充血，炎癥細(xì)胞的浸潤，肺間質(zhì)水腫，4h出現(xiàn)典型ALI的表現(xiàn)：透明膜形成，6h與4h病理半定量評(píng)分比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；在氣管內(nèi)滴入大腸桿菌12h后，發(fā)現(xiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤、氣道上皮細(xì)胞的脫落，肺泡水腫，24h出現(xiàn)肺泡上皮細(xì)胞空泡化，壞死，細(xì)胞增殖，大量纖維蛋白的滲出，透明膜形成，部分肺實(shí)變。36h較24h病理半定量評(píng)分無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。給予

5、激素干預(yù)后，LPS模型在2h、4h、6h可見浸潤的炎癥細(xì)胞減少，蛋白滲出減少，病理半定量評(píng)分也相應(yīng)減少；E．coli模型在24h、36h出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤及透明膜減少，但病理半定量評(píng)分無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 2、BALF中細(xì)胞總數(shù)、蛋白含量和肺組織W/D的變化：在LPS模型中BALF中細(xì)胞計(jì)數(shù)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，肺泡灌洗液中細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯增多，給予激素后肺泡灌洗液中細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯下降；肺泡灌洗液中蛋白4h達(dá)高峰，6h開始下降，激素干預(yù)組同比

6、相應(yīng)下降；濕干比，在LPS組2h較對(duì)照組明顯升高，但隨著時(shí)間的推移，未出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的進(jìn)一步增加，激素干預(yù)組同比相應(yīng)下降；在Ecoli模型中肺泡灌洗液中細(xì)胞計(jì)數(shù)，肺泡灌洗液中蛋白，濕干比，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，未出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的增加，12h、24h與36h比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，給予激素后24h、36h均明顯下降。
　　 3、血清中TNF-α含量的變化：血清中TNF-α的水平，在LPS模型2h、4h、6h與NS組比明顯升高，三組隨著時(shí)間的延

7、長(zhǎng)，出現(xiàn)升高→高峰-降低的變化趨勢(shì)。給予激素干預(yù)后，TNF-α的含量較模型組同比明顯下降。在Ecoli模型中12h、24h、36h與NS組比明顯升高，三組隨著時(shí)間的發(fā)展，同樣出現(xiàn)升高→高峰→降低的變化趨勢(shì)。給予激素后，TNF-α的含量較模型組無明顯變化。
　　 4、肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α含量的變化：血清中TNF-α的水平，在LPS模型2h、4h、6h與NS組比明顯升高，三組隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，出現(xiàn)升：升高→高峰→降低的變

8、化趨勢(shì)。給予激素干預(yù)后較模型組同比下降。在Ecoli模型中12h、24h、36h與NS組比明顯升高，三組趨勢(shì)同LPS模型；給予激素干預(yù)后，較模型組無明顯改善。
　　 結(jié)論：
　　 1、不同時(shí)間點(diǎn)脂多糖和大腸桿菌誘發(fā)肺內(nèi)外ALI模型均成功。
　　 2、LPS模型在4h達(dá)到典型ALI病理表現(xiàn)，大腸桿菌模型在24h同樣達(dá)到典型表現(xiàn)，說明這兩種模型ALI的發(fā)展過程的時(shí)間窗存在不同。
　　 3、糖皮質(zhì)激素的療效與導(dǎo)

9、致肺損傷的誘因密切相關(guān)。兩種模型激素干預(yù)后，LPS主要表現(xiàn)為纖維蛋白滲出減少，肺水腫減輕。大腸桿菌主要表現(xiàn)為炎細(xì)胞浸潤減少，纖維蛋白滲出也有所減輕，但總的病理評(píng)分并無明顯改善。借以說明臨床治療中對(duì)肺內(nèi)和肺外ALI應(yīng)用激素的干預(yù)治療要區(qū)別對(duì)待。
　　 4、兩種模型血清和BALF中TNF-α隨時(shí)間改變出現(xiàn)相同的趨勢(shì)變化，激素干預(yù)后，LPS模型血清和BALF有明顯改善；大腸桿菌模型血清和BALF中基本無改善。可得出激素對(duì)內(nèi)毒素導(dǎo)致的肺