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文檔簡介
1、本研究將能殺滅部分寄生蟲<'[1]>的蘇云金芽孢桿菌(Baoillus thudngie)、能凈化水質(zhì)、增強(qiáng)水產(chǎn)動物免疫力、促進(jìn)魚類生長<'[2-3]>的枯草芽孢桿菌(Bacillussubtills)和分解纖維素<'[4]>的生孢噬纖維菌(Sporocytophaga myxoooocoides),進(jìn)行原生質(zhì)體融合,希望得到具有三親本優(yōu)良特性于一體的益生菌。通過篩選最終得到一株具有產(chǎn)生芽孢、水解淀粉、降解纖維素,產(chǎn)生植酸酶的多功能融合
2、子。 主要結(jié)果如下: 1.從土壤中分離純化蘇云金芽孢桿菌,并對物理生化特性進(jìn)行鑒定。結(jié)果獲得了一株產(chǎn)芽孢能力較強(qiáng)的蘇云金芽孢桿菌菌株BS-12。 2.分別對枯草芽孢桿菌和生孢噬纖維菌的二元融合子BP-1 和蘇云金芽孢桿菌BS-12 進(jìn)行生長曲線測定,結(jié)果顯示BS-12和BP-1對數(shù)生長中后期分別為6.0小時、7.0小時。 3.利用單因素試驗(yàn)探討影響蘇云金芽孢桿菌BS-12和二元融合子BP-1原生質(zhì)體的形成
3、率和再生率的因素,結(jié)果顯示葡萄糖、甘氨酸和青霉素能影響原生質(zhì)體的形成和再生;BS-12、BP-1最佳溶菌酶濃度分別為6.0 mg/mL,5.0 mg/mL;最佳酶解時間分別為60分鐘,60分鐘。在最佳優(yōu)化體系下,BS-12菌株的原生質(zhì)體形成率和再生率分別82.7%,32.4%;二元融合子BP-1菌株為84.6%,34.6%。 4.用熱滅活的方法對蘇云金桿菌BS-12原生質(zhì)體進(jìn)行滅活處理,用紫外線對二元融合菌株BP-1進(jìn)行滅活處理
4、,結(jié)果顯示:BS-12原生質(zhì)體在60℃下滅活時間25分鐘,原生質(zhì)體的死亡率為100%;BP-1原生質(zhì)體用紫外滅活5 min,死亡率達(dá)100%。 5.在PEG6000和Ca<'2+>存在下,立即將BS-12和BP-1的原生質(zhì)體在37℃水浴箱中融合60 min,再進(jìn)行融合子篩選。在再生培養(yǎng)基上獲得68株三元融合子,連續(xù)傳代10代,獲得一株較穩(wěn)定的三元融合子FM-20-1。 6.比較親本及融合子菌落表型,顯微形態(tài),生化特性,酶
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