肝細(xì)胞癌中泛素—蛋白酶體系統(tǒng)與p27蛋白表達(dá)的關(guān)系和臨床意義.pdf

1、背景：
　　泛素（ubiquitin,Ub）是在真核細(xì)胞生物中普遍存在的一種具有高度保守性的蛋白質(zhì)[1]。真核細(xì)胞蛋白質(zhì)降解途徑主要為泛素-蛋白酶體系統(tǒng)（Ubiquitinproteasomesystem,UPS），通過該蛋白酶體系統(tǒng)降解細(xì)胞內(nèi)泛素化的蛋白質(zhì)。相關(guān)研究表明細(xì)胞內(nèi)大部分泛素化蛋白質(zhì)通過UPS降解。泛素化是細(xì)胞維持對受環(huán)境刺激所產(chǎn)生蛋白質(zhì)水平的基本調(diào)節(jié)方式。UPS是真核細(xì)胞內(nèi)主要的蛋白質(zhì)控系統(tǒng)，不僅可以高度選擇及高效性

2、的參與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換，而且參與多種生理過程，包括細(xì)胞器的發(fā)生；細(xì)胞周期的增殖、分化、凋亡；基因轉(zhuǎn)錄；信號傳導(dǎo)；抗原提呈；蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)；DNA修復(fù)等[2、3]。隨著對UPS的深入研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞周期調(diào)控的重要分子p27是新近發(fā)現(xiàn)的一種CKI，其在刺激細(xì)胞分化和抑制細(xì)胞增殖等方面的重要作用越來越受到重視。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)p27蛋白降解與UPS有著密切的關(guān)系，在直腸癌、膽囊癌、乳腺癌等腫瘤組織中得到證實(shí)[4]，但UPS對p27蛋白降解調(diào)節(jié)的機(jī)制尚不清

3、楚。本實(shí)驗(yàn)通過免疫組織化學(xué)方法結(jié)合蛋白免疫印跡技術(shù)，檢測肝細(xì)胞癌組織中Ub、p27蛋白的表達(dá)水平。同時(shí)觀察Ub、p27蛋白在不同肝細(xì)胞癌病理分級之間表達(dá)的關(guān)系，探討兩者在肝細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展中的關(guān)系和作用。
　　目的：
　　研究人肝細(xì)胞癌組織中泛素-蛋白酶體系統(tǒng)和p27蛋白的異常表達(dá)，及兩者與肝細(xì)胞癌不同病理分級的關(guān)系及臨床意義。試圖分析UPS系統(tǒng)和p27蛋白低表達(dá)在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的機(jī)制、作用和意義，以期為肝細(xì)胞癌的臨床診

4、斷、預(yù)后判斷、治療等各方面提供新的理論支持和幫助。
　　方法：
　　1．采用免疫組織化學(xué)法，分別檢測人肝細(xì)胞癌不同病理分級組織中Ub和p27蛋白表達(dá)的情況，定性分析人肝細(xì)胞癌組織中Ub和p27蛋白的異常表達(dá)情況與臨床病理分級之間的相關(guān)性；
　　2．采用蛋白免疫印跡技術(shù)，分別檢測人肝細(xì)胞癌不同病理分級組織中Ub和p27蛋白表達(dá)量的情況，結(jié)合免疫組織化學(xué)方法檢測的結(jié)果，定性和半定量的分析人肝細(xì)胞癌組織中Ub和p27蛋白的異

5、常表達(dá)情況與臨床病理分級之間的相關(guān)性；
　　3．采用胞漿和胞核蛋白分離技術(shù)，分別檢測肝細(xì)胞癌不同病理分級組織的胞核及胞漿中Ub和p27蛋白的表達(dá)，進(jìn)一步分析Ub和p27作用的部位和意義。
　　結(jié)果：
　　1．免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果示：肝細(xì)胞癌不同病理分級組織中均有Ub、p27蛋白的表達(dá)，Ub蛋白定位于細(xì)胞核及細(xì)胞漿，其表達(dá)隨分化程度降低反而增高（P<0.05）；p27蛋白主要定位于細(xì)胞核，其表達(dá)隨分化程度降低而降低（P<

6、0.05）；分析Ub和p27蛋白的表達(dá)與病理分級有明顯的相關(guān)性（P<0.05）。
　　2．蛋白免疫印跡檢測結(jié)果示：肝細(xì)胞癌組織Ub蛋白表達(dá)量隨分化程度降低反而增高，各組織組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；P27蛋白表達(dá)量在低分化組均低于高分化和中分化組，組織組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但高分化和中分化組織組間無明顯差異（P>0.05）；
　　3．采用胞漿和胞核分離技術(shù)，分別檢測兩者蛋白在胞漿和胞核中表達(dá)情況。實(shí)

7、驗(yàn)結(jié)果顯示：不同病理分級組織細(xì)胞胞漿中可檢測到Ub和p27蛋白的表達(dá)，表達(dá)量與不同分化程度組織間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但較總蛋白中兩者蛋白表達(dá)量，胞漿中兩者蛋白表達(dá)量明顯減少；肝細(xì)胞癌組織胞核中，Ub蛋白表達(dá)量隨分化程度降低反而增高，各組織組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而肝細(xì)胞癌組織胞核中，p27蛋白表達(dá)隨分化程度降低而降低，各細(xì)胞組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　在肝細(xì)胞癌不同病理