大黃(庶蟲)蟲丸對實驗性動脈粥樣硬化大鼠TNF-a及CD40L表達的影響.pdf

1、目的：動脈粥樣硬化(AS)是危害人體生命健康最嚴重的疾病之一，是心腦血管疾病共同的病理基礎。一直以來AS的研究被視為研究心腦血管疾病發(fā)病機理及尋求治療手段的突破點。目前，動脈粥樣硬化形成與發(fā)展的分子生物學方面的發(fā)生機制，已成為當今心腦血管疾病領域研究熱點，已引起社會廣泛關注。
　　 腫瘤壞死因子-α(TNF-α)主要由單核細胞和（或）巨噬細胞分泌后，通過促進血管內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞的增殖、影響脂類攝取與代謝，使血脂水平增高及增加

2、細胞間質(zhì)膠原的合成等參與動脈粥樣硬化的形成。
　　 CD40-CD40L系統(tǒng)是炎癥過程中重要的信號通路，廣泛參與了細胞免疫、體液免疫和炎癥反應的調(diào)節(jié)，動脈粥樣硬化的關鍵細胞成分上均有CD40和CD40L表達，兩者結合能誘導人血管內(nèi)皮細胞表達多種活性介質(zhì)，參與動脈粥樣硬化斑塊的形成。阻斷CD40-CD40L通路可防止動脈粥樣硬化或阻止已形成的斑塊進展，為預防心血管事件的發(fā)生提供了一個新的途徑。
　　 TNF-a及CD40L

3、是動脈粥樣硬化發(fā)病的主要危險因素，有效地控制TNF-a及CD40L表達是預防動脈粥樣硬化的關鍵。
　　 大黃蜜蟲丸是活血化瘀的祖方，出自漢張仲景著《金匱要略·血痹虛勞病脈癥并治第六》中，由熟大黃、黃芩、生地黃、蜜蟲、水蛭、蠐螬、虻蟲、桃仁、杏仁、芍藥、干漆、甘草12味藥物組成，具有疏通經(jīng)絡、破瘀生新、緩中補虛之功效。本方配伍獨特，既有破血逐瘀之蟲類藥，又有滋陰養(yǎng)血清熱之品。近10多年來對大黃(?)蟲丸的臨床應用和實驗研究在不斷深

4、入和擴大，眾多醫(yī)家根據(jù)其扶正不留瘀，祛瘀不傷正這一特點，用于治療多種疾病取得了滿意的療效。大黃蜜蟲丸在臨床上應用十分廣泛，但在循環(huán)系統(tǒng)方面效果顯著。本實驗主要采用經(jīng)典喂養(yǎng)法加VitD3復制動脈粥樣硬化模型，從血脂水平、血管內(nèi)皮細胞功能及TNF-a及CD40L炎癥因子表達等方面觀察大黃蜜蟲丸抗動脈粥樣硬化的作用。
　　 方法：
　　 1實驗藥物大黃(?)蟲丸購自徐州頤海藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號：060402，實驗前將藥物分別

5、研成粉劑按計量比例制成兩個濃度混懸液(0.7g/kg，1.4g/kg)供使用。血脂康膠囊購自北大威信生物科技有限公司，批號：20061211，實驗前將藥物按計量比配成混懸液(0.3g/kg)（用藥量相當于成人每日每公斤體重的15倍）。
　　 2AS動物模型的建立飼喂基礎飼料的大鼠40只，常規(guī)觀察一周隨即分為5組，每組8只，對照組、模型組、大黃蜜蟲丸高劑量組、大黃蜜蟲丸低劑量組、陽性對照組。除對照組給與基礎飼料外，其余各組飼喂高脂

6、飼料（配方1％膽固醇、0.35％膽酸、5％煉制豬油、0.1％丙硫氧嘧啶及基礎飼料）的大鼠按70萬單位VitD3/kg的總劑量分三天腹腔注射，連續(xù)觀察21天后.模型組：每天灌胃蒸餾水(1ml/100g)；大黃(?)蟲丸低劑量組：大黃蜜蟲丸混懸液0.7g生藥/kg灌胃；大黃蜜蟲丸高劑量組：大黃蜜蟲丸混懸液1.4g生藥/kg灌胃；陽性對照組：血脂康混懸液0.3g/kg灌胃。繼續(xù)觀察8周。
　　 3觀察指標實驗結束后大鼠斷頭取血，低溫離

7、心3000r/min；15min分離血清，血脂中的總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)采用酶法；一氧化氮(NO)采用硝酸還原法；內(nèi)皮素(ET)采用放射免疫法；腫瘤壞死因子(TNF-a)用放射免疫平衡法測定。CD40檢測采用免疫組化法進行檢測。具體操作按試劑盒說明書進行。處死大鼠并立即剖取主動脈弓，剝離外膜附著組織，一部分置于10％福爾馬林固定，石蠟切片，用于HE染色、免疫

8、組化染色，觀察病理變化。
　　 4統(tǒng)計學處理采用SPSS11.0forwindows統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計。數(shù)據(jù)用又±s表示，采用組間對照方差分析法。
　　 結果：
　　 1大黃蜜蟲丸對模型大鼠血清血脂水平的影響模型組血清TG，TC，LDL-C含量比對照組明顯升高(P＜0.05)，血清HDL-C明顯降低(P＜0.01)，表明模型組出現(xiàn)脂代謝紊亂（血脂異常）。血脂康組TG，TC，LDL-C含量較模型組明顯降低(P＜0

9、.05)；大黃(?)蟲丸(0.7g生藥/kg)與模型組對比TG，LDL-C明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05)，與血脂康組對比，其降低TC作用不及血脂康組，有顯著性差異(P＜0.05)；大黃蜜蟲丸(1.4g生藥/kg)與模型組對比TG，TC，LDL-C明顯降低(P＜0.01，P＜0.05)，HDL-C含量明顯升高(P＜0.01)，有顯著差異(P＜0.01)，與血脂康組對比，LDL-C明顯升高，有顯著性差異(P＜0.05)，且降低TG、

10、LDL-C作用明顯。表明大黃蜜蟲丸高低劑量均有調(diào)節(jié)血脂的作用，且大黃蜜蟲丸高劑量較低劑量作用更明顯，升高HDL-C優(yōu)于血脂康組。
　　 2大黃(?)蟲丸對模型大鼠血清NO、ET水平的影響模型組血清NO較對照組顯著降低(P＜0.05)，ET水平明顯升高(P＜0.05)；血脂康組與模型組比較NO水平升高，ET降低，有顯著性差異(P＜0.05)；大黃蜜蟲丸低劑量組與模型組對比血清NO水平升高，ET水平降低但無顯著性差異；大黃蜜蟲丸高劑

11、量組與模型組對比血清NO水平顯著升高，ET水平明顯降低；其作用趨勢為大黃蜜蟲丸高劑量組＞血脂康組＞大黃蜜蟲丸低劑量組。
　　 3主動脈病理檢查：正常對照組：光鏡下組織學切片示正常主動脈壁內(nèi)膜、中膜、外膜均清晰可見，各層結構規(guī)整，內(nèi)膜無脂質(zhì)沉積改變，含少量膠原纖維和平滑肌纖維，彈力纖維分布均勻，未見異常改變。模型組：光鏡下主動脈壁內(nèi)膜顯著增厚向管腔突起，病灶表面由纖維細胞、膠原纖維構成纖維帽，其下方有脂質(zhì)、少許炎細胞，可見粥樣斑塊

12、形成。大黃蜜蟲丸低劑量組：主動脈內(nèi)膜稍有增厚，病灶可見表層纖維帽較薄，其下為大量泡沫細胞。大黃蜜蟲丸高劑量組：主動脈內(nèi)膜無明顯增厚，平滑肌細胞排列較規(guī)整，但可見輕度水腫。未見膽固醇結晶，亦未見溶解壞死組織。血脂康組：主動脈內(nèi)膜無明顯增厚，彈力纖維形態(tài)稍迂曲。未見膽固醇結晶，亦未見溶解壞死組織。
　　 4大黃蜜蟲丸對模型大鼠血清TNF-a水平的影響模型組血清比對照組TNF-a顯著升高(P＜0.05)；血脂康組、大黃蜜蟲丸低劑量組、

13、大黃蜜蟲丸高劑量組與模型組對比血清中的TNF-a顯著降低(P＜0.05)；血脂康組、大黃蜜蟲丸低劑量組、大黃蜜蟲丸高劑量組血清TNF-a水平無明顯差別。
　　 5大黃(?)蟲丸對主動脈血管壁CD40L表達的影響正常對照組：未見棕黃色顆粒（-）。模型組：血管內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞及泡沫細胞胞漿內(nèi)呈強陽性表達(++)；血脂康組：血管內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞及泡沫細胞胞漿內(nèi)呈弱陽性表達（±）；大黃蜜蟲丸低劑量組：血管內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞及泡

14、沫細胞胞漿內(nèi)呈陽性表達(+)；大黃蜜蟲丸高劑量組血管內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞及泡沫細胞胞漿內(nèi)呈弱陽性表達(±)。表明大黃蜜蟲丸高、低劑量均可抑制血管壁CD40L的表達。
　　 結論：
　　 1大黃蜜蟲丸主要通過降低甘油三酯、低密度脂蛋白，升高高密度脂蛋白發(fā)揮調(diào)節(jié)血脂作用，且存在劑量依賴性。
　　 2大黃(?)蟲丸可調(diào)節(jié)NO/ET平衡，保護血管內(nèi)皮細胞功能。
　　 3大黃蜜蟲丸可減少TNF-a等炎癥因子釋放，抑