ASGM1介導(dǎo)PTX預(yù)處理小鼠發(fā)生過(guò)敏樣休克的作用及機(jī)制.pdf

1、背景：
　　過(guò)敏性休克的主要發(fā)病機(jī)制為:變應(yīng)原與肥大細(xì)胞表面特異性IgE結(jié)合,介導(dǎo)IgE受體FcεRI交聯(lián),激活肥大細(xì)胞使之脫顆粒并釋放組胺等過(guò)敏性介質(zhì),導(dǎo)致過(guò)敏反應(yīng)發(fā)生。此外,變應(yīng)原也可與特異性IgG1抗體結(jié)合,介導(dǎo)FcγRIII交聯(lián),激活嗜堿粒細(xì)胞而引發(fā)過(guò)敏性休克,PAF是參與此機(jī)制的主要效應(yīng)分子。但是,上述機(jī)制并不能用于解釋臨床患者和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所見的全部過(guò)敏反應(yīng)現(xiàn)象。作者前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),給EAE小鼠或經(jīng)PTX預(yù)處理的小鼠注射抗A

2、SGM1抗體,可導(dǎo)致體溫降低、活動(dòng)能力下降甚至死亡等過(guò)敏樣休克癥狀。
　　目的：
　　進(jìn)一步證實(shí)抗ASGM1抗體可導(dǎo)致PTX預(yù)處理的小鼠發(fā)生過(guò)敏樣休克,并探討其作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.動(dòng)物模型制備:在第0天和第2天腹腔注射PTX,第7天通過(guò)腹腔或尾靜脈分別注射抗ASGM1抗體、抗PK136抗體、PAF、PTX和重組鞭毛蛋白。
　　2.體內(nèi)封閉:使用不同抗體和拮抗劑處理,如抗MAR-1抗體清除嗜堿粒細(xì)

3、胞;抗PK136抗體用于清除NK細(xì)胞和NKT細(xì)胞;氯化釓(GdCl3)用于清除單核/巨噬細(xì)胞;triprolidine抑制組胺作用;CV-3988抑制PAF作用。
　　3.檢測(cè)指標(biāo):
　　(1)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面ASGM1表達(dá),及PTX處理組嗜堿粒細(xì)胞數(shù)量變化和功能改變;ELISA檢測(cè)血清IgE水平。
　　(2)體外培養(yǎng)骨髓來(lái)源嗜堿粒細(xì)胞,觀察抗ASGM1抗體刺激后胞漿鈣離子濃度和ERK磷酸化反應(yīng),以及LysoPA

4、FAT/LPCAT2mRNA水平改變。
　　(3)Evansblue檢測(cè)血管通透性,鬼筆環(huán)肽檢測(cè)F-actin(反映PAF和PTX對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的作用)。
　　(4)Real-time PCR、組織免疫熒光和WB檢測(cè)PTX處理對(duì)組織和內(nèi)皮細(xì)胞IL-33合成和釋放的影響。
　　結(jié)果:
　　1.抗ASGM1抗體和細(xì)菌鞭毛蛋白均可通過(guò)ASGM1介導(dǎo)PTX預(yù)處理小鼠發(fā)生過(guò)敏樣休克。
　　2.ASGM1介導(dǎo)的過(guò)敏樣休克中

5、,嗜堿粒細(xì)胞是主要效應(yīng)細(xì)胞,PAF是主要效應(yīng)分子。
　　3.抗ASGM1可直接導(dǎo)致嗜堿粒細(xì)胞胞漿鈣離子濃度升高、ERK通路活化,活化的嗜堿粒細(xì)胞可合成、釋放PAF。
　　4.PTX處理可直接導(dǎo)致血管通透性升高,并升高內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)PAF敏感性,小鼠易發(fā)過(guò)敏性休克。
　　5.PTX處理可致嗜堿粒細(xì)胞升高,提高IgE水平,增強(qiáng)嗜堿粒細(xì)胞功能。
　　6.PTX處理可促進(jìn)組織及內(nèi)皮細(xì)胞釋放IL-33。
　　結(jié)論: