東北肉羊LPL基因多態(tài)性與肉質(zhì)性狀的關(guān)聯(lián)分析.pdf

1、本試驗以脂蛋白脂肪酶(Lipoprotein Lipase,LPL)作為東北肉羊肉質(zhì)性狀的候選基因，研究其外顯子上的單核甘酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)位點及其與肉質(zhì)性狀的關(guān)聯(lián)，為改善肉羊肉質(zhì)及其遺傳育種提供分子生物學(xué)基礎(chǔ)。
　　本試驗以48頭成年健康的東北肉羊肌肉組織樣本為材料，提取總 RNA與基因組 DNA，采用 RT-PCR和 TA克隆方法成功克隆了東北肉羊的 LPL基

2、因cDNA序列并對其進行生物信息學(xué)分析；將 LPL基因作為肉質(zhì)性狀的候選基因，應(yīng)用直接測序和PCR-RFLP相結(jié)合的方法對LPL基因部分外顯子進行SNPs篩選，并通過一般線性模型分析研究了 LPL基因多態(tài)性與肉質(zhì)性狀的關(guān)聯(lián)。主要試驗結(jié)果如下：
　　1.提取了總 RNA，通過 RT-PCR的方法，克隆了東北肉羊 LPL基因的完整編碼序列，并對其進行了序列測定。對東北肉羊 LPL基因完整編碼序列進行生物信息學(xué)分析，結(jié)果表明，東北肉羊

3、LPL基因 ORF（開放閱讀框）長1437 bp，共編碼了478個氨基酸。
　　2.通過直接測序及 PCR-RFLP技術(shù)，對東北肉羊 LPL基因第3、4、5和6外顯子進行序列測定與多態(tài)性分析，發(fā)現(xiàn)LPL基因第3和4外顯子上存在SNPs位點，而第5和6外顯子則未發(fā)現(xiàn)SNPs位點。這些SNPs位點分別是：第3外顯子46 bp處 T/C(T304C)，第3外顯子126 bp處 A/T(A384T)，第4外顯子24 bp處T/C(T462

4、C)。這3個SNP位點都沒有引起氨基酸變異，屬于同義突變。
　　3.對東北肉羊第3外顯子 A384T突變位點進行酶切與基因分型，并統(tǒng)計基因頻率、基因型頻率、χ2-Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)、基因純合度(Ho)、基因雜合度(He)、有效等位基因數(shù)(Ne)、多態(tài)信息含量(PIC)等數(shù)據(jù)。結(jié)果表明，東北肉羊群體在該位點的遺傳變異為低度多態(tài)(PIC＜0.25)，并處于 Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)(P＞0.05)。

5、>　　4.對第3外顯子 A384T突變位點各基因型與肉質(zhì)性狀進行關(guān)聯(lián)性分析，結(jié)果表明該位點 TT型滴水損失極顯著高于 TA型和 AA型(P＜0.01)；TT型 pH1值顯著高于TA型(P＜0.05)，與AA型則差異不顯著(P＞0.05)；壓榨損失、熟肉率和剪切力性狀在各基因型間差異不顯著(P＞0.05)。TT型肉豆蔻酸含量顯著低于TA型和AA型(P＜0.05)；TT型棕櫚酸含量顯著低于TA型(P＜0.05)，與AA型則差異不顯著(P＞0