轉(zhuǎn)錄因子Ikaros在肺癌發(fā)生發(fā)展中的功能和調(diào)控.pdf

1、天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文轉(zhuǎn)錄因子Ikaros在肺癌發(fā)生發(fā)展中的功能和調(diào)控姓名：陳娜申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物學(xué)；生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：劉喆201205天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文SKBR3細胞；運用shRNA成功下調(diào)了Ikaros在H69細胞的表達；運用構(gòu)建質(zhì)粒和細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)成功在A549細胞中過表達Ikaros；細胞的形態(tài)變化：在H69細胞中下調(diào)Ikaros的表達豐度之后，細胞的形態(tài)由原來的懸浮狀態(tài)逐漸變?yōu)橘N壁狀態(tài)；在A549細

2、胞中上調(diào)Ikaros的表達豐度后，原來的貼壁細胞逐漸變得貼壁不緊了；細胞劃痕試驗和Transwell試驗結(jié)果：Ikaros的過表達能夠抑制A549細胞的遷移能力和侵襲能力；RealTimePCR結(jié)果：檢測出Ikaros可抑制和細胞轉(zhuǎn)移和侵襲相關(guān)基因(Nanog、ErbB2、SIPl、TGFcz、ⅡSMA)的表達；免疫組化實驗結(jié)果：檢測到Ikaros在癌旁組織中不表達，在人的肺癌組織中低分化的腫瘤細胞中Ikaros的表達量多于高分化的腫瘤

3、細胞。2DNA去甲基化是Ikaros在肺癌細胞中異位表達的主要調(diào)控機制利用BLAST軟件對人和小鼠的Ikaros基因序列進行比對，發(fā)現(xiàn)11個同源序列，分別為homol，hom02，hom03，hom04，hom05，hom06，hom07，hom08，hom09，homol0和homoll：ChIP實驗結(jié)果：H3K27乙?；虷3K4單甲基化(這兩種修飾是增強子的標志)在U937細胞系中的同源序列hom04、hom05和homoll有富

4、集，而在H1155和A549細胞中無富集，說明這三個同源序列是潛在的增強子，而這三個增強子在H1155細胞中不具有功能；3C結(jié)果顯示U937細胞中其啟動子區(qū)與其上游的同源序列hom04、hom05和hom011在空間結(jié)構(gòu)上相互接近，H1155細胞沒有形成這樣的高級結(jié)構(gòu)，進一步證實hom04、hom05和homoll三個增強子只在U937細胞中活躍，在H1155細胞中盡管Ikaros異位表達，但增強子不起作用；H3K9乙?；3K4二甲

5、基化和三甲基化在U937細胞中的啟動子區(qū)有明顯的富集，在H1155和A549細胞中沒有富集，說明組蛋白修飾的改變并非Ikaros異位表達的因素；Bisulfite—Sequencing實驗結(jié)果表明：在Ikaros表達的U937，H209，H1155細胞中的DNA甲基化程度明顯低于Ikaros不表達的A549，MDAMB231和Beas2B細胞，說明DNA去甲基化是Ikaros在肺癌細胞H1155表達的原因。結(jié)論：Ikaros在肺癌細胞的