誘導(dǎo)性一氧化氮合成酶iNOS在大鼠穿透性角膜移植中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：
　　 同種異體角膜移植是治療角膜盲最為有效的方法,而角膜移植排斥反應(yīng)仍然是移植失敗的主要因?yàn)?；角膜新生血管是角膜盲的主要因?yàn)?亦是角膜移植排斥反應(yīng)的高危因素。因此,如何防治角膜移植術(shù)后排斥反應(yīng)及新生血管一直是角膜病研究領(lǐng)域的重點(diǎn)和難點(diǎn)。
　　 目前的研究表明,角膜的炎癥、感染、變性、外傷都會(huì)使血管生成因子和抗血管發(fā)生因子之間的平衡傾斜,刺激原有角膜緣血管生成CNV。一氧化氮不僅是一種內(nèi)源性血管擴(kuò)張劑還是一種炎癥介

2、質(zhì)。iNOS是一氧化氮生成的合成酶,催化機(jī)體產(chǎn)生一氧化氮參與血管生成、腫瘤發(fā)展和轉(zhuǎn)移等過程。有關(guān)iNOS在CNV發(fā)生過程中的作用報(bào)道很少,且有完全相反結(jié)論的報(bào)道。我們可以認(rèn)為iNOS與CNV的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。此外,一系列體內(nèi)和體外試驗(yàn)提示NO具有免疫作用。因此,iNOS有可能參與了角膜移植排斥反應(yīng)及新生血管形成的過程。
　　 方法：
　　 隨機(jī)選取健康成年雌性Wistar大鼠15只為供體,雄性SD大鼠30只為受體,做

3、異體角膜移植為實(shí)驗(yàn)組,另取18只做自體角膜移植為移植對(duì)照組。余3只SD大鼠(6眼)作為正常對(duì)照組。術(shù)后,每日于裂隙燈顯微鏡下觀察角膜以及眼前段組織的變化。于術(shù)后第1d,3d,7d,14d,21d,28d各隨機(jī)處死5只異體角膜移植實(shí)驗(yàn)組大鼠,2只自體角膜移植對(duì)照組大鼠正常組3只大鼠于實(shí)驗(yàn)結(jié)束前處死,取角膜標(biāo)本行石蠟切片、蘇木素-伊紅(hemotoxylin and eosin,HE)染色觀察新生血管生長和炎性浸潤情況；以免疫組織化學(xué)方法檢

4、測角膜移植片iNOS的表達(dá)水平。每張切片角膜中央?yún)^(qū)隨機(jī)取5個(gè)400倍視野,使用計(jì)算機(jī)圖像分析軟件計(jì)算平均灰密度值,取其平均值作為該標(biāo)本各檢測指標(biāo)的表達(dá)率。
　　 結(jié)果：
　　 (一)角膜新生血管及植片存活情況
　　 異體角膜移植術(shù)后1d可見明顯水腫,術(shù)后7d可見角膜新生血管長入植片,14d為高峰,21d以后逐漸消退。自體對(duì)照組新生血管及排斥反應(yīng)均未及異體移植組明顯。
　　 (二)組織病理學(xué)檢查
　　

5、 術(shù)后1天時(shí)異體角膜移植實(shí)驗(yàn)組切片可見輕度水腫,少量炎性細(xì)胞浸潤,7d時(shí)可見大量炎性細(xì)胞及新生血管,14d時(shí)達(dá)到高峰,21d以后炎性細(xì)胞減少新生血管萎縮。自體移植對(duì)照組無論是炎性細(xì)胞數(shù)還是新生血管數(shù)量均未及異體移植實(shí)驗(yàn)組。
　　 (三)免疫組織化學(xué)
　　 iNOS在正常對(duì)照組大鼠角膜上皮層及基質(zhì)層僅有少量表達(dá),術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)自體、異體角膜移植實(shí)驗(yàn)組均較正常對(duì)照組表達(dá)明顯增強(qiáng)(P=0.000、0.000、0.000、0.0

6、00,0.000,0.000,0.001,0.000,0.000,0.000,0.000,0.000,0.000,F=236.453、132.785、144.727、326.412、163.883、53.116、25.868、140.831、123.902、64.913、264.474、378.131),表達(dá)范圍主要在基質(zhì)層炎性細(xì)胞、角膜上皮細(xì)胞及新生血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿內(nèi)。異體移植實(shí)驗(yàn)組及自體移植對(duì)照組均在術(shù)后第14d表達(dá)最強(qiáng)烈。3d后異