一種SD大鼠皮膚光老化動物模型的建立.pdf

1、人類皮膚的老化是一個非常復雜而漫長的過程，主要受遺傳因素及環(huán)境因素的影響。遺傳因素引起的皮膚老化稱為自然老化;在環(huán)境因素中，又以紫外線的影響最大，所以由環(huán)境因素引起的皮膚老化又稱為光老化。皮膚光老化有特定的發(fā)生原因和影響因素，與自然老化相比皮膚光老化具有特征性的臨床表現(xiàn):皮膚變薄、失去彈性、正常的皮紋加深，而光老化則表現(xiàn)為皮膚粗糙、深亂皺紋、色素沉著或脫失、癌前病變，癌變，并伴有相應的組織學及分子生物學水平的改變。造成光老化的紫外線主要

2、由長波(UVA320-400nm)和中波(UVB290-320nm)組成，其中UVB是造成皮膚損傷的主要原因。目前臨床皮膚光老化疾病的發(fā)病機制尚不明確，因此建立光老化動物模型對研究光老化機制和治療光老化疾病有著重要的意義。因此，如何建立一種模擬性強、操作簡便和評價指標明確的光老化動物模型一直是研究熱點，但目前國內(nèi)外皮膚光老化實驗研究動物模型的造模方法，以及檢驗模型的成功與否仍沒有統(tǒng)一標準。
　　 目的:
　　 針對建立一

3、種實用的皮膚光老化動物模型的關鍵步驟與方法進行探討，并針對光老化動物模型建立過程中的幾個關鍵問題進行探討，以期為皮膚光老化的研究提供試驗基礎。
　　 材料和方法:
　　 選擇健康雄性SD大鼠20只，隨機分2組，空白對照組10只、光老化模型組10只。用標記筆標出預照射范圍，去除該范圍內(nèi)毛發(fā)，造模組用紫外線光療儀進行照射，每天一次，每次15分鐘，共8周時間。造模完成后分別切取兩組大鼠背部皮膚，每份標本分為兩份，一份立即投入液

4、氮，然后置于-80℃冰箱保存以備提取RNA用;另一份經(jīng)固定、脫水、石蠟包埋后切片、常規(guī)染色，顯微鏡下觀察并采圖。
　　 統(tǒng)計學方法熒光定量PCR結果分析，用2-△△Ct的方法將Ⅰ型、Ⅲ型膠原與內(nèi)參基因β-actin做對比，以2-△△Ct值對每組樣本的Ⅰ型、Ⅲ型膠原mRNA相對表達量進行比較分析，2-△△Ct值≥2或≤0.5有統(tǒng)計學意義。
　　 結果:
　　 1.肉眼觀光老化組大鼠背部皮膚增厚，粗糙，并出現(xiàn)明顯的粗

5、大溝紋。組織病理HE染色鏡下可見，光老化組大鼠較對照組表皮增厚，真皮膠原變性、斷裂、減少、排列紊亂，甚至凝集呈塊狀，少量炎癥細胞浸潤。
　　 2.熒光定量PCR結果顯示光老化組大鼠皮膚Ⅰ型、Ⅲ型膠原△Ct值明顯低于對照組，且差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結論:
　　 1.選取SD大鼠作為實驗動物，操作性強，8周即可完成光老化動物模型的建立。
　　 2.光老化模型組比對照組大鼠皮膚的Ⅰ型、Ⅲ型膠原的mRNA表達