“肺炎Ⅰ號(hào)”對(duì)肺間質(zhì)纖維化大鼠治療作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的采用博萊霉素A5(BLMA5)氣管注入建立大鼠肺間質(zhì)纖維化模型，觀察中藥復(fù)方“肺炎Ⅰ號(hào)”治療肺間質(zhì)纖維化的療效，并探討其改善肺間質(zhì)纖維化的作用機(jī)制及途徑，以期在中醫(yī)藥領(lǐng)域?qū)υ摬〉闹委煂?shí)現(xiàn)新的突破，并為臨床治療提供充分的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法雄性Wistar大鼠64只，隨機(jī)分為4組：對(duì)照組、模型組、中藥“肺炎Ⅰ號(hào)”組、激素組。對(duì)照組氣管內(nèi)注入生理鹽水，其余3組氣管內(nèi)注入博萊霉素制作大鼠肺間質(zhì)纖維化模型。造模后，中藥組給中藥“肺

2、炎Ⅰ號(hào)”方1ml/100g灌胃，激素組給氫化可的松2mg/100g皮下注射，模型組和對(duì)照組均給生理鹽水灌胃，均給藥1次/天，療程為4周。治療期間觀察記錄大鼠飲食、體重、精神狀況、活動(dòng)情況、皮毛色澤、呼吸情況等一般狀況。在7、28天分組、分批處死大鼠。取左肺用4％多聚甲醛固定后，常規(guī)處理切片，行蘇木素-伊紅染色、苦味酸天狼猩紅染色，并結(jié)合計(jì)算機(jī)圖像分析儀進(jìn)行觀察。7天時(shí)對(duì)右肺用37℃無(wú)菌生理鹽水行支氣管肺泡灌洗，回收支氣管肺泡灌洗液以獲取

3、肺泡巨噬細(xì)胞，28天時(shí)取右肺組織作細(xì)胞培養(yǎng)獲取的肺間質(zhì)巨噬細(xì)胞以核酸原位雜交法染色后觀察TGF-β1mRNA的表達(dá)，觀察中藥的治療效果，同時(shí)作組間的兩兩比較。 結(jié)果1正常對(duì)照組活潑好動(dòng)，反應(yīng)靈敏，皮毛光澤發(fā)亮，身體健壯肥碩，善打斗，飲食如常，體重逐漸增加，呼吸平穩(wěn)，二便正常，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)無(wú)動(dòng)物死亡；模型組精神不振，懶動(dòng)，反應(yīng)遲鈍，拱背蜷縮，皮毛枯槁，無(wú)光澤，多見(jiàn)倒豎現(xiàn)象，飲食、排便均減少，28天時(shí)明顯較其它組消瘦，懶動(dòng)，咳喘，死

4、亡5只；中藥組皮膚尚可，較活潑，身體較壯，飲食較模型組好，體重增長(zhǎng)基本正常，動(dòng)物無(wú)死亡；激素組開(kāi)始尚可，后期出現(xiàn)消瘦，懶動(dòng)，皮毛干枯，咳喘，飲食減少現(xiàn)象，狀態(tài)不如早期，動(dòng)物死亡4只。造模后7天、28天，正常組體重明顯高于模型組(P＜0.05)；中藥組體重較模型組增加，但無(wú)明顯差異(P＞0.05)；7天時(shí)激素組體重較模型組增加，28天時(shí)激素組體重較模型組降低，但無(wú)明顯差異(P＞0.05)。 2氣管內(nèi)注入博萊霉素第28天時(shí)，空白組呈

5、正常肺結(jié)構(gòu)；模型組多呈3級(jí)肺纖維化和1級(jí)肺泡炎改變；中藥組多呈1級(jí)纖維化改變，肺泡炎不明顯；激素組多呈1級(jí)纖維化和1-3級(jí)肺泡炎改變。7天、28天時(shí)肺泡炎、肺纖維化分級(jí)結(jié)果，正常組與模型組之間有顯著性差異(P＜0.05)。7天時(shí)激素組與模型組之間有顯著性差異(P＜0.05)；28天時(shí)中藥組、激素組與模型組之間有顯著性差異(P＜0.05)。結(jié)合圖像分析儀定量分析，7天時(shí)灰度掃描無(wú)染面積比較，正常組、中藥組和激素組明顯高于模型組(P＜0.0

6、5)；灰度掃描深染面積和淺染面積比較，正常組、中藥組和激素組與模型組比較1無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。28天時(shí)灰度掃描無(wú)染面積比較，正常組和中藥組明顯高于模型組(P＜0.05)；激素組較模型組高，但無(wú)顯著性差異(P＞0.05)?；叶葤呙枭钊久娣e和淺染面積比較，正常組、中藥組和激素組與模型組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。 3正常組膠原分布主要在支氣管周?chē)?、血管周?chē)头闻蓍g隔，以纖細(xì)的綠色Ⅲ型膠原纖維為主。7天時(shí)模型組膠原在各

7、部位均有分布，并在局部肉芽組織中分布較多，纖細(xì)的綠色Ⅲ型膠原纖維和黃色、桔紅色Ⅰ型膠原纖維混雜并居；28天肺纖維化形成后，模型組血管、氣管周?chē)源执蟮狞S色、桔紅色Ⅰ型膠原纖維為主，肺間質(zhì)周?chē)鷦t以纖細(xì)的綠色Ⅲ型膠原纖維為主。中藥組和激素組Ⅰ、Ⅲ型膠原的表達(dá)較同期模型組對(duì)照組均顯著減少。7天時(shí)正常組、中藥組正常組、中藥組肺組織膠原分型比例與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)；28天時(shí)正常組、中藥組及激素組與模型組比較有顯著性差異(P＜0

8、.05)。28天時(shí)在血管、氣管周?chē)鹘M膠原分型比例無(wú)顯著性差異(P＞0.05)；在肺間質(zhì)周?chē)＝M、中藥組及激素組與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)。 4正常組、中藥組及激素組7天、28天時(shí)TGF-β1mRNA陽(yáng)性細(xì)胞率、積分光密度明顯低于模型組(P＜0.05)。 結(jié)論1光鏡下肺組織病理觀察及檢測(cè)肯定了本研究中大鼠肺纖維化模型復(fù)制的成功。 2“肺炎Ⅰ號(hào)”對(duì)特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化的防治作用可能是通過(guò)抑制細(xì)胞因子T